24小时热门版块排行榜

南方科技大学公共卫生及应急管理学院2025级博士研究生招生报考通知

返回列表

夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)

应助: 69 (初中生)
金币: 5116.5
红花: 18
帖子: 1048
在线: 441.4小时
虫号: 1427657
注册: 2011-10-05
性别: MM
专业: 微生物生理与生物化学

[求助] 扩全长选walking还是RACE?已有2人参与

最近根据N端保守区和中间一个保守区域扩增出一个大约700bp的片段，比对后发现是我要的酶，现在想扩增全长，查了些资料后，不知道该选哪个方法，请虫友们给个建议。我的菌是细菌，现在知道5‘端的700个碱基，具体全序列有多长还不知道，查了些资料说可以用genome walking或者race，这两种选哪一个比较好呢？

回复此楼

» 猜你喜欢

为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种? 已经有5人回复
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》已经有3人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有67人回复
求助食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社电子版已经有5人回复
胶体几丁质的结晶度？已经有0人回复
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士已经有2人回复
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线已经有5人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

引物设计基因全长的获得已经有13人回复
只知道基因CDS区序列，如何扩增该基因的启动子已经有11人回复
【求助/交流】最近，我想扩一个基因的RNA全长，因为是新手，我用哪个公司的race试剂盒已经有9人回复
【求助/交流】生物合成基因簇的克隆方法已经有12人回复
【分享】提高PCR特异性的方法已经有10人回复
【求助/交流】求助基因克隆方面的问题解决方案已经有17人回复
【求助/交流】PCR法克隆基因已经有8人回复

1楼2014-03-20 15:35:53

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

专家经验: +24
MolEPI: 31
应助: 599 (博士)
贵宾: 2.689
金币: 24326.9
散金: 1088
红花: 88
沙发: 2
帖子: 2327
在线: 623.1小时
虫号: 849017
注册: 2009-09-16
性别: GG
专业: 细胞信号转导
管辖: 分子生物

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-03-21 10:32:48
夏天的普洱茶: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2014-03-21 20:46:12

引用回帖:

7楼: Originally posted by 夏天的普洱茶 at 2014-03-20 19:20:55
我用的是原核的菌，又没有内含子，为什么一定要用cDNA做模板扩增？...

由于你是原核的，所以获得cDNA的全长序列和基因所在的全长基因组序列是一样的

你这个问题的本质就是你需要扩增你已知的700bp序列的侧翼序列，即所谓的genome walking

由已知序列扩未知序列，方法有很多
常用的有iPCR，adaptor-PCR，Tail-PCR，个人经验iPCR配合nested PCR成功率比较高