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双酶切 已有3人参与
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最近在做双酶切（TAKARA家的Xba1/Xho1 共用Buffer为10XM）,想重新构建真核表达载体（目的片段210bp+载体） 1、双酶切（20μl体系，1-3小时都试过），只能切开Xho1位点（与分步酶切对照过） 2、分步双酶切，第一步酶切，不管先切哪个位点，跑胶检测都能切开，但是到第二步酶切结束，想切胶回收的时候，却怎么也跑不出条带来了，只是模糊的一片，像拖带一样，我的DNA去哪儿了？愁死了，求高手指点迷津，感激不尽啊，跪谢！！！ 注：关于分步酶切胶回收损失的问题，我特意在第一步酶切结束后，尝试过三种方法 a、切胶回收（测得浓度为60ng左右） b、不跑胶，直接在原体系里进行第二步酶切 c、不跑胶，直接过柱回收（切胶回收试剂盒，不是专业的DNA分离柱） |
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