应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 大神请进，定量PCR的阈值问题
71/1返回列表
查看: 5206  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

圣迭戈

铜虫 (小有名气)

[求助] 大神请进，定量PCR的阈值问题 已有3人参与

我发现阈值调高调低，最终的基因拷贝数会有很大的变化啊。那么阈值到底应该是以什么标准来调整？到多少合适？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-03-07 09:17:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
............
    这个东西一般机子会自己根据公式来算，你最好不要自己调着玩.............
赞一下(1人) 回复此楼
Let God do with it as He wills
2楼2014-03-07 10:16:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangweijian

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
圣迭戈: 金币+10, ★有帮助 2014-03-16 10:27:57
高于荧光背景信号，也就是对数增长期刚开始时。
赞一下 回复此楼
3楼2014-03-07 12:25:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ...
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-03-08 09:34:14
圣迭戈: 金币+50, ★★★很有帮助 2014-03-16 10:27:19
让软件自动选就可以了，一般是第3到第15个循环的荧光信号的标准偏差的十倍。手动调的话，当然不可能去算那个标准差，只要选在指数扩增开始阶段就好了。虽然调整阈值会让Ct值也跟着变动，但这个变化是所有的Ct值都跟着变的，各个Ct值之间的差异还是一样的。也就是说，只要阈值设置是在指数扩增区，调大点或者小点，最终的定量结果是差不多的。
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

g0945111
4楼2014-03-08 00:51:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-08 09:34:45
圣迭戈: 金币+10, ★有帮助 2014-03-16 10:27:38
一般都是机器自己选择阈值，也可以自己调，阈值调整一般在对数升高期初始开始设置。
赞一下 回复此楼
hehe
5楼2014-03-08 08:52:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

圣迭戈

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 西瓜 at 2014-03-08 00:51:20
让软件自动选就可以了，一般是第3到第15个循环的荧光信号的标准偏差的十倍。手动调的话，当然不可能去算那个标准差，只要选在指数扩增开始阶段就好了。虽然调整阈值会让Ct值也跟着变动，但这个变化是所有的Ct值都跟 ...

我一开始也是用软件默认的阈值。后来发现在指数区稍微调大调小一点，最后的定量结果在同一个数量级上会差很多啊，比如都是10^7，前面的数字可能会从2.0到8.0都可能。感觉不靠谱啊。
赞一下 回复此楼
6楼2014-03-09 10:41:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

g0945111

木虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by 西瓜 at 2014-03-08 00:51:20
让软件自动选就可以了，一般是第3到第15个循环的荧光信号的标准偏差的十倍。手动调的话，当然不可能去算那个标准差，只要选在指数扩增开始阶段就好了。虽然调整阈值会让Ct值也跟着变动，但这个变化是所有的Ct值都跟 ...

可是我还是有个问题，那既然阈值可以调-这样对应的Ct值就会不同，出来的定量结果就会不一样，我们最终定量的意义不就在于看看这个模板到底有多少拷贝数，这个值肯定是一定的呀。那我们出来的结果怎么对比，是说多少个循环对应下的它的拷贝数是多少这样来比较么？若果所有的机器每次设定的阈值一个定值这个结果就确实有可比性，但这个可能性不大吧，每个设定的阈值是不一样的。求赐教这个问题！谢谢
赞一下 回复此楼
7楼2016-09-13 10:51:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 圣迭戈 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0854控制工程 359求调剂 可跨专业 +3 626776879 2026-03-14 9/450 2026-03-16 17:42 by 626776879
[基金申请] 今年的国基金是打分制吗？ 50+3 zhanghaozhu 2026-03-14 3/150 2026-03-16 17:07 by 北京莱茵润色
[考研] 304求调剂 +4 ahbd 2026-03-14 4/200 2026-03-16 16:48 by 我的船我的海
[考研] 318求调剂 +3 Yanyali 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:41 by houyaoxu
[考研] 326求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-15 3/150 2026-03-16 07:33 by Iveryant
[考研] 070305求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-14 4/200 2026-03-15 11:04 by peike
[考研] 297一志愿上交085600求调剂 +5 指尖八千里 2026-03-14 5/250 2026-03-14 17:26 by a不易
[考研] 328求调剂 +3 5201314Lsy！ 2026-03-13 6/300 2026-03-14 15:31 by hyswxzs
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:30 by JourneyLucky
[考研] 318求调剂 +3 李新光 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:21 by JourneyLucky
[考研] 279求调剂 +3 Dizzy123@ 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:02 by JourneyLucky
[考研] 求材料调剂 +5 隔壁陈先生 2026-03-12 5/250 2026-03-13 22:03 by 星空星月
[考研] 0856材料与化工301求调剂 +5 奕束光 2026-03-13 5/250 2026-03-13 22:00 by 星空星月
[考研] （081700）化学工程与技术-298分求调剂 +12 11啦啦啦 2026-03-11 35/1750 2026-03-13 21:25 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +7 18880831720 2026-03-11 7/350 2026-03-13 16:10 by JourneyLucky
[考研] 085600材料与化工 309分请求调剂 +7 dtdxzxx 2026-03-12 8/400 2026-03-13 14:43 by jxchenghu
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +3 d如愿上岸 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:43 by houyaoxu
[考研] 420求调剂 +4 莫向外求11 2026-03-10 6/300 2026-03-12 14:41 by ruiyingmiao
[基金申请] 提交后的基金本子，已让学校撤回了，可否换口子提交 +3 dut_pfx 2026-03-10 3/150 2026-03-11 08:38 by kudofaye
[考研] 哈工大材料324求调剂 +6 闫旭东 2026-03-10 8/400 2026-03-10 22:49 by 星空星月
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭