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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 求助Millipore0.5ml超滤管的使用
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tangmincui

新虫 (小有名气)

[求助] 求助Millipore0.5ml超滤管的使用 已有1人参与

离子交换后，蛋白样品盐含量高，想通过超滤除盐，并换Buffer，下一步要转膜测序。因为样品不到100ul，所以买的0.5ml超滤管。
        但是现在手里只有15ml超滤管的使用方法。现在请教各位高手指点，0.5ml 10kda 超滤管使用方法，特别是离心力上限及其他注意事项。
        越详细越好！谢谢了！
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1楼 2014-03-03 15:34:49
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dehong1573

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
tangmincui: 金币+5 2014-03-08 09:20:59
和大的一样做就行了，理论上离心力不要超过4000g，但也不会太要紧，加置换buffer的时候可以吹打膜，避免膜堵掉！
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科学永无止境,只有合作共享才能更好地……
4楼2014-03-07 08:43:51
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akuau

木虫 (著名写手)
请问你的离子交换是怎么做的？为啥离子交换之后还会有高浓度盐呢？
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学海拾贝
2楼2014-03-06 08:40:01
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tangmincui

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by akuau at 2014-03-06 08:40:01
请问你的离子交换是怎么做的？为啥离子交换之后还会有高浓度盐呢？

用Tris-HCl 7.4作为平衡液，上样1ml，再用1.0MNaCl梯度洗脱，电泳检测条带，大约在60%1MNaCl时有蛋白。然后想将收集液脱盐，再做别的实验。
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3楼2014-03-06 12:37:50
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tangmincui

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by dehong1573 at 2014-03-07 08:43:51
和大的一样做就行了，理论上离心力不要超过4000g，但也不会太要紧，加置换buffer的时候可以吹打膜，避免膜堵掉！

恩，我用的3500g，但是我基本没离心下来什么。之前看4ml超滤管最大可以7500g（35度角度的离心机），所以加大到6500g，还是没有什么东西，我估计是膜堵了。但是样品又很少，100ul，不知道怎么过滤呢?你有什么好办法没？
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5楼2014-03-08 09:24:17
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