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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 【有奖活动】~高效液相色谱仪应用有奖活动，仪器应用交流【金币放送，参与有奖】~
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炜少

木虫 (正式写手)

[交流] 【有奖活动】~高效液相色谱仪应用有奖活动，仪器应用交流【金币放送，参与有奖】~

祝各位虫友：身体健康，完事如意。
各位虫友，在我们对食品、药品、环境等做分析时，我们经常要采用一种精度较高的仪器——高效液相色谱仪来进行精密的分析，在我们使用高效液相色谱仪时，是否遇到过保留时间有差异、分离度不够、出现鬼峰或者仪器上压力不稳定、流动相的选择等问题呢？有时几天都解决不了，有时经过努力分析探索终于解决了问题，实验可以继续进行了。
   参与到我这里来吧！在这里，您可以畅所欲言，将你所遇到的问题或者一些心得与大家一起分享，对一些主要问题进行总结与归纳，争取能够“集思广益”，为您解决问题，解除困惑，让我们对高效液相色谱仪应用时减少问题的发生，减少工作时间与工作量，让您能够轻轻松松做液相。
   参与到这里来吧，本人新虫，提供不了太多的金币赏金，发帖旨在让大家有个交流的平台，让困惑的您能在这里找到满意的解决方案，让参与进来的您能得到提高，让大家共同进步。
奖励规则：
1、回帖参与，即有机会获得1~3BB奖励；
2、提出困扰您的问题，参与讨论，奖励2~5BB；
3、回答困扰虫子们的问题，参与讨论，奖励3~6BB；
4、分享成功经验，交流自己对液相使用中的问题及解决方案。奖励4~8BB。
**********************************************
　　友情提示：专业讨论贴，请勿灌水哦~


[ Last edited by 炜少 on 2014-3-3 at 15:28 ]
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1楼2014-03-03 11:31:28
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csc_0769

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
炜少: 金币+5, 分享了自己的经验，指出了预柱的优缺点，多谢交流。 2014-03-05 10:09:16
炜少: 回帖置顶 2014-03-05 10:09:26
引用回帖:
19楼: Originally posted by 炜少 at 2014-03-04 13:11:54
有没有高手来给分享一下“预柱”使用的优缺点，什么时候需要加预柱？？？

我随便说啊，错了请指点：1，可以过滤样品中滤膜滤不掉的物质
2，保护色谱柱
3，加大仪器使用的压力
4，可能会导致峰展宽
5，费钱，换芯的时候，心都碎了
6，预柱容易接不好，导致漏液，严重影响心情
一般在流动相有伤柱子的物质的时候加上，还有样品成分复杂，容易导致色谱柱报废的时候加上。
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33楼2014-03-05 09:17:05
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北京秦方

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
液相色谱工作原理其实也不复杂，出现问题，首先要找到目标，然后在分析目标。
我大概提及几点。
1.压力为0。
     那关注的只有泵，无阻尼出液正常，有柱子不正常，那就是单向阀的问题。一般走甲醇乙腈这类的没这个现象，走含缓冲盐的甲醇-水很容易有这个现象。
分析：为什么单向阀效率会降低？
    流动相过滤不充分，2次水置放时间较长，缓冲盐析出等等。
解决方法：清洗单向阀，有两种方式，一种是拆下来放甲醇-异丙醇等溶剂里-超声；一种是把流动相换成甲醇等，大流速运行（拿掉柱子）。

2.出峰不正常。
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4楼2014-03-03 15:01:50
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北京秦方

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
炜少: 金币+5, 很高兴虫友能分享自己的心得，希望您以后能多多参与，为虫友解决问题。 2014-03-03 15:42:20
继续楼上

2.出峰不正常。
那关注的只有检测器，色谱柱，样品，就不考虑泵了。
这个出峰问题实际很复杂，但是解决的方法也简单。
分析：为什么昨天正常，今天不正常？
    液相色谱有很大的不确定性，所以一般做分析，严谨的过程中还需要方法。我们分析一般会当天做完或者连续的做完，如用外标法测试一个样品，不会把上周的标样数据和今天的联系起来。
解决方法：排除法。
  一般实验室最少也会有两根以上的色谱柱，最简单的是换柱子和样品，如果还一样，那就检测器本身的问题了。排除仪器的老化，实验室温度的影响，除了关注波长，关注的是氘灯的问题。
   首先看波长，无论是进口还是国产检测器，多波长的，都是通过机械方式改变光栅的方向来改变波长的，时间长了，这个波长会有不准，所以的检测器都有波长校准的功能，不妨校准一下。
    再看灯能量，看静态基线，看噪声和漂移。如果很差，那就是灯的问题。

3.梯度洗脱不理想
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5楼2014-03-03 15:12:10
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北京秦方

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
费姚永芬: 金币+5, 谢谢交流，欢迎常来分析版，期待您更多的分享 2014-03-04 12:41:19
继续楼上
3.梯度洗脱不理想
二元高压梯度，为什么会用到梯度，简单的答案就是为了更好的分析。
分析：为什么峰分离效果不如之前的好。
  两台泵按照一定的比例运行，如果有一台有故障，那么反映出来的不是压力为0，因为系统中压力处处相同，有一台泵正常就有压力。所以除了泵就是混合器的问题。
解决方案：排除测试，单独测试泵分别都正常，流动相、梯度表正常，色谱柱、样品正常、那就是混合器了。
   虽然混合器只是单单把两种液体混为一种，但是作用很大。如果有动态混合器的，可以试一试，开与不开的效果。混合器里大多有过滤的筛板和石英棉，这些是需要定期更换的。

4.出峰重现性不好。
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6楼2014-03-03 15:23:05
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炜少

木虫 (正式写手)


[ Last edited by 炜少 on 2014-3-5 at 16:37 ]
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8楼2014-03-03 15:32:10
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匿名

用户注销 (正式写手)
★
炜少: 金币+1 2014-03-07 10:38:26
本帖仅楼主可见
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36楼2014-03-05 10:41:53
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炜少

木虫 (正式写手)
引用回帖:
47楼: Originally posted by tianxia119wo at 2014-03-06 09:49:11
额，瓶子里是10%甲醇，天天过滤的，而且当天两个人各重新配置了一份。就是这个10%甲醇压力高。。。换别的泵也是如此。在别的仪器上压力<5bar，我们这台仪器诡异的是 甲醇 乙腈 压力<1bar，水，10%甲醇压力都 ...

安捷伦的仪器啊，他这个仪器2-3个月左右就得更换一次过滤白头，不得就堵。
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48楼2014-03-06 09:53:00
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gukuyisheng

铁杆木虫 (职业作家)
没怎么用过

[ Last edited by gukuyisheng on 2014-3-3 at 15:33 ]
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7楼2014-03-03 15:31:14
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炜少

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 北京秦方 at 2014-03-03 15:12:10
继续楼上

2.出峰不正常。
那关注的只有检测器，色谱柱，样品，就不考虑泵了。
这个出峰问题实际很复杂，但是解决的方法也简单。
分析：为什么昨天正常，今天不正常？
    液相色谱有很大的不确定性，所以一般 ...

出峰不正常也可能与泵有关啊，泵的密封圈损坏或者流速不准确了，也会导致峰的改变的吧。
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9楼2014-03-03 15:44:49
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yanliang12

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我正在探索中，准备好好学习怎样使用HPLC。
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12楼2014-03-03 20:15:31
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userhung

禁虫 (文学泰斗)
学习了哦~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~
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14楼2014-03-03 20:38:11
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炜少

木虫 (正式写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by userhung at 2014-03-03 20:38:11
学习了哦~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~

应用中有什么问题提出来啊，大家一起想办法。
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15楼2014-03-03 21:01:23
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费姚永芬

版主 (文学泰斗)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
12楼: Originally posted by yanliang12 at 2014-03-03 20:15:31
我正在探索中，准备好好学习怎样使用HPLC。

可以站内搜索，本版有很多优秀资源可供学习
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16楼2014-03-04 12:42:03
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炜少

木虫 (正式写手)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 费姚永芬 at 2014-03-04 12:42:03
可以站内搜索，本版有很多优秀资源可供学习...

版块里的人好少啊，都没人拿出问题来讨论。
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17楼2014-03-04 13:08:47
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费姚永芬

版主 (文学泰斗)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
17楼: Originally posted by 炜少 at 2014-03-04 13:08:47
版块里的人好少啊，都没人拿出问题来讨论。...

还好吧，我每天评阅那么多帖子
有一个现象是这样，有人只是来求助，问题问完就走，没有过多的交流。
其实我希望有更多您这样的交流主题发布。
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18楼2014-03-04 13:11:26
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炜少

木虫 (正式写手)
炜少: 回帖置顶 2014-03-04 13:46:25
炜少: 取消置顶 2014-03-06 14:33:34
有没有高手来给分享一下“预柱”使用的优缺点，什么时候需要加预柱？？？
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19楼2014-03-04 13:11:54
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炜少

木虫 (正式写手)
引用回帖:
18楼: Originally posted by 费姚永芬 at 2014-03-04 13:11:26
还好吧，我每天评阅那么多帖子
有一个现象是这样，有人只是来求助，问题问完就走，没有过多的交流。
其实我希望有更多您这样的交流主题发布。...

是啊 我新虫，一直都混新药研发，有机交流，但是我更擅长高效液相色谱，这个还没有保密协议，而且还能顶顶版块热度，真心的感觉人好少。
赞一下 回复此楼
20楼2014-03-04 13:14:16
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炜少

木虫 (正式写手)
引用回帖:
18楼: Originally posted by 费姚永芬 at 2014-03-04 13:11:26
还好吧，我每天评阅那么多帖子
有一个现象是这样，有人只是来求助，问题问完就走，没有过多的交流。
其实我希望有更多您这样的交流主题发布。...

总不能自卖自夸吧，我自己提问题，在我自己说解决方案，那就没有意义了。
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21楼2014-03-04 13:15:30
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费姚永芬

版主 (文学泰斗)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
20楼: Originally posted by 炜少 at 2014-03-04 13:14:16
是啊 我新虫，一直都混新药研发，有机交流，但是我更擅长高效液相色谱，这个还没有保密协议，而且还能顶顶版块热度，真心的感觉人好少。...

那你以后多来板块交流
金币奖励多多哦。
谢谢你给其他虫友答疑解惑。
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22楼2014-03-04 13:16:34
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费姚永芬

版主 (文学泰斗)
引用回帖:
21楼: Originally posted by 炜少 at 2014-03-04 13:15:30
总不能自卖自夸吧，我自己提问题，在我自己说解决方案，那就没有意义了。...

哈哈哈哈，也可以的，这样算交流的一种，分享经验啊，别人可以对你所研究的方向有深入了解。
不要谦虚。
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23楼2014-03-04 13:18:31
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炜少

木虫 (正式写手)
引用回帖:
23楼: Originally posted by 费姚永芬 at 2014-03-04 13:18:31
哈哈哈哈，也可以的，这样算交流的一种，分享经验啊，别人可以对你所研究的方向有深入了解。
不要谦虚。...

那我还不如发个资源帖呢，呵呵。以后我每天挂一个问题 看有没有人来答。
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24楼2014-03-04 13:25:10
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zhaoeager

至尊木虫 (文坛精英)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
祝福祝福祝福........................
........................
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25楼2014-03-04 13:44:38
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孙ZONGZI

铁杆木虫 (文坛精英)
祝好
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26楼2014-03-04 14:00:55
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匿名

用户注销 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
炜少: 回帖置顶 2014-03-04 22:33:23
炜少: 金币+2, 能提出自己的问题，多来交流，给与支持。 2014-03-04 22:35:36
炜少: 取消置顶 2014-03-05 16:16:53
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27楼2014-03-04 21:48:11
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匿名

用户注销 (正式写手)
★ ★
炜少: 回帖置顶 2014-03-04 22:33:24
炜少: 金币+2, 能提出自己的问题，给与支持。 2014-03-04 22:36:08
炜少: 取消置顶 2014-03-05 16:17:05
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28楼2014-03-04 21:49:37
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炜少

木虫 (正式写手)
引用回帖:
28楼: Originally posted by 王迷霞 at 2014-03-04 21:49:37
还有个问题啊，换了新电脑连接上液相后，模式里只有等度洗脱，没有梯度洗脱了，这是怎么回事呢？

你的液相可以梯度洗脱吗，有的话梯度洗脱得设置液相方法的，不设置当然是等度洗脱了，不会设可以问前辈，我不知道你是什么工作站，也没法讲解怎么设。
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29楼2014-03-04 22:30:24
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炜少

木虫 (正式写手)
引用回帖:
27楼: Originally posted by 王迷霞 at 2014-03-04 21:48:11
走的液相基线很平，非常平，一条直线。进样品也有出峰，基线还是很平，但同样的条件和前辈们的谱图相差很大，有没有人知道是怎么回事啊，求解答啊

有可能是你柱效降低了，杂质峰走不出来了，也有可能是不是你仪器方法设错了，梯度洗脱你用成等度洗脱了?
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30楼2014-03-04 22:32:21
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tianxia119wo

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炜少: 金币+2, 希望你能多多的参与交流。 2014-03-07 10:40:08
这几天样品瓶A泵打开脱气阀后，5ml/min的流速，压力15bar，很高了。别的泵都很好，<1bar，然后自己将B泵和A泵的管道切换一下，然后B泵正常了，A泵压力偏高，然后AB两个都放到B样品瓶里，最后确认是A样品瓶子脏了或者流动相不干净。慢慢排除原因，还是可以的。
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32楼2014-03-05 09:04:52
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炜少

木虫 (正式写手)
引用回帖:
33楼: Originally posted by csc_0769 at 2014-03-05 09:17:05
我随便说啊，错了请指点：1，可以过滤样品中滤膜滤不掉的物质
2，保护色谱柱
3，加大仪器使用的压力
4，可能会导致峰展宽
5，费钱，换芯的时候，心都碎了
6，预柱容易接不好，导致漏液，严重影响心情
一般在 ...

可以用国产的吗，那样换芯的时候，就不用心碎了，而且这个柱心也可以处理一下还能继续用，甲醇-异丙醇-甲醇，分别超声20min，柱心调过来，不接柱子，冲一下，把筛板上的杂质冲下来，再清洗一下，都可以有效的延长柱心的使用时间。
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34楼2014-03-05 10:13:40
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匿名

用户注销 (正式写手)
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35楼2014-03-05 10:41:22
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匿名

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37楼2014-03-05 10:44:40
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匿名

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38楼2014-03-05 10:48:02
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csc_0769

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34楼: Originally posted by 炜少 at 2014-03-05 10:13:40
可以用国产的吗，那样换芯的时候，就不用心碎了，而且这个柱心也可以处理一下还能继续用，甲醇-异丙醇-甲醇，分别超声20min，柱心调过来，不接柱子，冲一下，把筛板上的杂质冲下来，再清洗一下，都可以有效的延长柱 ...

没用过国产的，一般用久了直接扔。这样洗有点担心，通常做有关物质的时候才需要加预柱的。
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39楼2014-03-05 11:13:55
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炜少

木虫 (正式写手)
引用回帖:
39楼: Originally posted by csc_0769 at 2014-03-05 11:13:55
没用过国产的，一般用久了直接扔。这样洗有点担心，通常做有关物质的时候才需要加预柱的。...

我都是做中药时加预柱，进口的柱心有点贵，呵呵。
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40楼2014-03-05 13:20:35
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tanglong1088

铁虫 (正式写手)
(^0^)

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41楼2014-03-05 15:04:54
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mjt2007

铁杆木虫 (职业作家)
好运
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43楼2014-03-05 16:05:58
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炜少

木虫 (正式写手)
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32楼: Originally posted by tianxia119wo at 2014-03-05 09:04:52
这几天样品瓶A泵打开脱气阀后，5ml/min的流速，压力15bar，很高了。别的泵都很好，<1bar，然后自己将B泵和A泵的管道切换一下，然后B泵正常了，A泵压力偏高，然后AB两个都放到B样品瓶里，最后确认是A样品瓶子脏了 ...

请问你的流动相多久没换了？
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44楼2014-03-05 16:20:33
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jellyxiaolv

金虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
炜少: 回帖置顶 2014-03-05 21:06:14
炜少: 金币+3, 常见而又诡异的问题，现在还不知道一个明确的解决办法，希望有高手来指点。 2014-03-07 10:37:57
我最近做液相时发现，我走的样品需要30min，基线在前20 min基线很水平，之后基线会向上漂移，是很明显向上倾斜了；；或者就是整个样品的基线看起来向上凸起；；不过总体不影响检测物质。想知道大概是什么样的原因？谁来帮个忙呀
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45楼2014-03-05 19:58:46
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炜少

木虫 (正式写手)
引用回帖:
45楼: Originally posted by jellyxiaolv at 2014-03-05 19:58:46
我最近做液相时发现，我走的样品需要30min，基线在前20 min基线很水平，之后基线会向上漂移，是很明显向上倾斜了；；或者就是整个样品的基线看起来向上凸起；；不过总体不影响检测物质。想知道大概是什么样的原因？ ...

你把样品用流动线溶解试试
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46楼2014-03-05 21:06:11
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tianxia119wo

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
炜少: 金币+1, 能及时发现并改正错误，给予支持。 2014-03-07 10:43:01
引用回帖:
44楼: Originally posted by 炜少 at 2014-03-05 16:20:33
请问你的流动相多久没换了？...

额，瓶子里是10%甲醇，天天过滤的，而且当天两个人各重新配置了一份。就是这个10%甲醇压力高。。。换别的泵也是如此。在别的仪器上压力<5bar，我们这台仪器诡异的是 甲醇 乙腈 压力<1bar，水，10%甲醇压力都在15bar左右，最后我们又更换了一次滤芯（白头），这样才好的。好郁闷啊！前面的结论错了。。。
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47楼2014-03-06 09:49:11
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晒太阳的小巷

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
给楼主捧个场~~~~摸条件，我们用的流动相需要调pH酸性，检测波长225 nm（末端吸收了有木有。。。）一开始用甲酸调pH，那小基线走的，锯齿状，一直不平。后来改用0.2%磷酸水，基线就平了。现在想来，是不是甲酸的截止波长和我们的检测波长太近了，干扰比较严重。我是新手也不太懂的说。。。。
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49楼2014-03-07 16:02:49
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炜少

木虫 (正式写手)
引用回帖:
49楼: Originally posted by 晒太阳的小巷 at 2014-03-07 16:02:49
给楼主捧个场~~~~摸条件，我们用的流动相需要调pH酸性，检测波长225 nm（末端吸收了有木有。。。）一开始用甲酸调pH，那小基线走的，锯齿状，一直不平。后来改用0.2%磷酸水，基线就平了。现在想来，是不是甲酸的截止 ...

呵呵 感谢支持  不过帖子已经封了 没有奖励了哦  
你这个问题我的理解是你用的是甲酸，甲酸本身对色谱柱的刺激性就比较强，一般时候能不用就不用，他的极性太强，一般都是柱子柱效降低了，用它活化用。
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50楼2014-03-07 17:07:09
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zhengce20072楼
2014-03-03 11:34   回复  
zhengce20073楼
2014-03-03 11:35   回复  
送红花一朵
jiaoxg10楼
2014-03-03 16:03   回复  
salooloo00111楼
2014-03-03 16:20   回复  
sjmr122113楼
2014-03-03 20:24   回复  
westlife91131楼
2014-03-04 23:33   回复  
freezhangp42楼
2014-03-05 15:28   回复  
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