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摩都520

铜虫 (小有名气)

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[求助] QPCR模板浓度一定要是200ng或以下吗已有2人参与

各位亲，我用的是takara RR047A反转试剂盒，得到的是1ug/20ul CDNA

看RR420A 荧光定量试剂盒上要求模板不大于100ng。据说是根据内参基因，使其不小于15而设。

我觉得假如一个组织中有几个基因，有的目的基因表达太低，那为使ct值不大于30，那是不是不用稀释就可以做了。

另：2、定量PCR定量的理论依据是什么？

特定的待扩增基因片段起始含量越大，则指数扩增过程越短，当扩增速率趋于稳定后，则无论原来样品中起始模板含量多少，Sample Text

最终含量一定是什么意思？

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摩都520

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只做一件事，做绝

1楼 2014-03-02 12:43:01

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condy

新虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

引用回帖:

3楼: Originally posted by 摩都520 at 2014-03-04 16:18:28
另：2、定量PCR定量的理论依据是什么？

特定的待扩增基因片段起始含量越大，则指数扩增过程越短，当扩增速率趋于稳定后，则无论原来样品中起始模板含量多少，最终含量都一定。

最终含量一定是什么意思？

不管开始浓度是多少，经过40循环后，所有的待扩增的基因产量差不多，在扩增曲线上显示的是荧光量一直。只是浓度低的，起峰迟些。