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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » QPCR模板浓度一定要是200ng或以下吗
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摩都520

铜虫 (小有名气)

[求助] QPCR模板浓度一定要是200ng或以下吗 已有2人参与

各位亲，我用的是takara RR047A反转试剂盒，得到的是1ug/20ul CDNA

看RR420A 荧光定量试剂盒上要求模板不大于100ng。据说是根据内参基因，使其不小于15而设。

我觉得假如一个组织中有几个基因，有的目的基因表达太低，那为使ct值不大于30，那是不是不用稀释就可以做了。


另：2、定量PCR定量的理论依据是什么？

特定的待扩增基因片段起始含量越大，则指数扩增过程越短，当扩增速率趋于稳定后，则无论原来样品中起始模板含量多少，Sample Text

最终含量一定是什么意思？
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摩都520

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只做一件事，做绝
1楼 2014-03-02 12:43:01
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若溪

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
摩都520(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 01:34:36
启始cDNA量一般是100ng,对于内参而言是控制其起峰不要太早，目的基因如表达量低可不用稀释。可预先进行普通PCR，大概确定其表达量，目的基因起峰一定不可早于内参基因，另外用的样本模板一定都要调均一，这也是为了后面定量的准确
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没有比脚更长的路，没有比人更高的山
4楼2014-03-05 15:00:36
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shiliyusly

新虫 (小有名气)
★ ★
摩都520(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 01:34:28
目的基因表达量太低，可以不稀释，但同时内参基因也要不稀释，再进行计算，因为最后定量的是目的基因相对于内参基因的相对表达量
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2楼2014-03-02 13:10:00
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摩都520

铜虫 (小有名气)
送红花一朵
另：2、定量PCR定量的理论依据是什么？

特定的待扩增基因片段起始含量越大，则指数扩增过程越短，当扩增速率趋于稳定后，则无论原来样品中起始模板含量多少，最终含量都一定。

最终含量一定是什么意思？
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只做一件事，做绝
3楼2014-03-04 16:18:28
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condy

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 摩都520 at 2014-03-04 16:18:28
另：2、定量PCR定量的理论依据是什么？

特定的待扩增基因片段起始含量越大，则指数扩增过程越短，当扩增速率趋于稳定后，则无论原来样品中起始模板含量多少，最终含量都一定。

最终含量一定是什么意思？

不管开始浓度是多少，经过40循环后，所有的待扩增的基因产量差不多，在扩增曲线上显示的是荧光量一直。只是浓度低的，起峰迟些。
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5楼2015-12-22 11:32:51
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