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红魔曼联

金虫 (正式写手)

[求助] 胞内酶 胞外酶鉴定 已有1人参与

如果分理出一株产酶菌,怎么鉴定产的该酶是胞内酶还是胞外酶呢?
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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dllchina: 金币+2, 鼓励热心应助 2014-02-25 15:18:28
红魔曼联: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2014-07-30 10:09:02
跑2个电泳就知道了。
一个发酵周期做完后,将发酵液离心得上清,进行SDS-PAGE;
同时将离心后的细胞,加缓冲液进行破碎,离心,上清液进行SDS-PAGE。

看你的目标条带是否出现。在上清液的PAGE胶中就是胞外酶;破碎后的PAGE胶中出现就是胞内酶。

值得注意的是,若是胞内酶,整个泳道都会有大小不一的条带,需要你的表达量达到一定量,才能在SDS-PAGE中看出来。

若你的表达量较低,或者仍不能确定,将上述2块PAGE胶进行western试验,就可以确定你的酶时胞外还是胞内了。
2楼2014-02-25 14:51:06
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