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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » Ligation后跑胶分析
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wanglavender

新虫 (初入文坛)

[求助] Ligation后跑胶分析 已有5人参与

这是我做的ligation后去一小部分sample跑的胶，顺序分别为Vector Insert and Ligation, 但ligation多条带， 这个能判断ligaiton的情况吗？学长说这个可能是有啦， 但我看不出来， ligation后连成环，这个多带该怎么分析？请大神指导哈，谢谢。
Ligation后跑胶分析
IMG_2783.JPG
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1楼 2014-02-22 08:31:29
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cs2951819

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-22 12:56:39
多条带是正常的，因为有些是成环，有些单链，有些两个质粒连一起，看不一定看的出来，你酶切和pcr检验一下

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2014-02-22 08:43:39
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意孤城_

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
质粒的构象会导致在跑环状的质粒时候出现3条带，正常。鉴定是否插入进去没有你这么鉴定的方法，酶切鉴定才行。
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3楼2014-02-22 15:33:26
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jiaolong11a

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
需要酶切鉴定一下再跑胶看看，质粒一般都是三条带
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多情总被无情扰。。。愁
4楼2014-02-22 15:36:07
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wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wanglavender: 金币+3, ★★★很有帮助, Yep, you are right. Beofre doing the transformation, I just want to check if the gel electrophoresis of ligation can indicate some clues about my plasmids. 2014-02-23 00:20:26
连接后直接转化大肠杆菌，挑取单克隆，再酶切鉴定，留下酶切正确的就好了。
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5楼2014-02-22 15:53:46
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
连接反应毕竟只有部分能连上，跑胶不容易看到。建议直接转化，挑阳性克隆就好了。
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hehe
6楼2014-02-22 19:35:20
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wanglavender

新虫 (初入文坛)
Thanks guys, your responses are all helpful. Now I kind of know what a successful ligation should be like, before doing transformation.
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7楼2014-02-23 00:22:18
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