应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 关于RNAi干扰的问题
131/2返回列表12下一页
查看: 3544  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

yushijiang30

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于RNAi干扰的问题 已有3人参与

我做真菌的干扰，我构建好的干扰片段：正向+intron+反向片段能不能插入到一个开放阅读框的下游，比如启动子——抗潮霉素基因——终止子，我能不能把片段插入到抗潮霉素基因——终止子 之间呢，还是只能放在启动子后面？

[ Last edited by silicare on 2014-3-3 at 08:42 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-02-21 11:38:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

意孤城_

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-30 16:22:26
我不明白一点，你要干扰的基因是真菌自身表达的还是？如果是自身表达为何又要转抗潮霉素基因？双重抑制？
表达siRNA或者shRNA的载体是个单独的，因为表达RNA的启动子一般和表达DNA的启动子是不一样的
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2014-02-22 15:17:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
插入在潮霉素基因后端好些，我们RNAi都是单独一个表达盒驱动，你这样会影响潮霉素表达。
赞一下(1人) 回复此楼
hehe
4楼2014-02-22 19:53:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

咆哮的白菜

金虫 (正式写手)
放在后面会不会和潮霉素一起翻译成融合蛋白啊？起不到干扰作用，放在前面会不会干扰潮霉素的翻译，不能筛选阳性转化子？感觉还是两套单独的转录系统比较靠谱吧。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下(1人) 回复此楼
姥姥不疼，舅舅不爱
10楼2014-02-24 15:43:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这个应该在前面吧。如果放在后面的话，在未表达基因之前，RNAi片段都已经断开了。我是这么认为的，不知道是不是这样。

还有，我现在做的克隆是分别的，按你的意思就是说1.启动子——抗潮霉素基因——终止子，2.启动子——正向+intron+反向片段——终止子。是两个载体，这是做植物的。
赞一下 回复此楼
2楼2014-02-21 15:05:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yushijiang30

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 意孤城_ at 2014-02-22 15:17:34
我不明白一点，你要干扰的基因是真菌自身表达的还是？如果是自身表达为何又要转抗潮霉素基因？双重抑制？
表达siRNA或者shRNA的载体是个单独的，因为表达RNA的启动子一般和表达DNA的启动子是不一样的

我做的是通过真菌介导干扰害虫，把干扰载体转入真菌，在真菌入侵昆虫的时候释放干扰片段到昆虫体内。抗潮霉素基因是用来筛选阳性真菌的，你说的RNAi干扰的启动子不一样，我的启动子是真菌的色氨酸启动子，启动500bp左右的干扰片段，这样行吗
赞一下 回复此楼
5楼2014-02-24 10:03:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yushijiang30

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lvbobo823 at 2014-02-22 19:53:10
插入在潮霉素基因后端好些，我们RNAi都是单独一个表达盒驱动，你这样会影响潮霉素表达。

我也是图省事，要是有适合的酶切位点，我打算插入到潮霉素基因下游，这样就不用重新连接启动子，终止子基因进去了，所以才问问我这样做行不行，如果不行，就只好重新构建一个表达盒了。

另问，干扰片段和超表达片段毕竟不一样，像超表达是要表达成蛋白质的，最好有单独的启动子启动，真核生物毕竟是单顺反子的，但是干扰载体不一样，他只要在转录结束后，正反片段互补形成颈环结构就行了，连在任何一个表达基因后边都不会对前边的基因表达形成阻碍，我这样理解正确吗？
赞一下 回复此楼
6楼2014-02-24 10:13:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by yushijiang30 at 2014-02-24 10:13:41
我也是图省事，要是有适合的酶切位点，我打算插入到潮霉素基因下游，这样就不用重新连接启动子，终止子基因进去了，所以才问问我这样做行不行，如果不行，就只好重新构建一个表达盒了。

另问，干扰片段和超表达 ...

是的
回复此楼
hehe
7楼2014-02-24 12:04:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

意孤城_

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by yushijiang30 at 2014-02-24 10:03:34
我做的是通过真菌介导干扰害虫，把干扰载体转入真菌，在真菌入侵昆虫的时候释放干扰片段到昆虫体内。抗潮霉素基因是用来筛选阳性真菌的，你说的RNAi干扰的启动子不一样，我的启动子是真菌的色氨酸启动子，启动500b ...

可以的，他们两个基因具有不同的表达盒，你的抗性基因和干扰基因要在两个不同的表达盒内，是2个阅读框。一个可以完整表达抗性基因，一个完整表达干扰基因，可以在一个载体上实现
赞一下 回复此楼
8楼2014-02-24 12:19:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yushijiang30

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 意孤城_ at 2014-02-24 12:19:27
可以的，他们两个基因具有不同的表达盒，你的抗性基因和干扰基因要在两个不同的表达盒内，是2个阅读框。一个可以完整表达抗性基因，一个完整表达干扰基因，可以在一个载体上实现...

好的，已经明白了。
回复此楼
9楼2014-02-24 15:22:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yushijiang30 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +16 羊腰板 2026-08-21 17/850 2026-08-23 23:02 by tianxiaochun
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +12 大萍1987 2026-08-20 15/750 2026-08-23 20:44 by 大萍1987
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +13 ziyangfang 2026-08-19 16/800 2026-08-22 17:08 by WH3796
[基金申请] 人气不行了 +8 fansofjerry 2026-08-21 8/400 2026-08-22 16:30 by zyqchem
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +16 医学老男孩 2026-08-20 20/1000 2026-08-21 21:13 by Ldrop2023
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭