24小时热门版块排行榜    

查看: 3550  |  回复: 12
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

yushijiang30

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于RNAi干扰的问题 已有3人参与

我做真菌的干扰,我构建好的干扰片段:正向+intron+反向片段能不能插入到一个开放阅读框的下游,比如启动子——抗潮霉素基因——终止子,我能不能把片段插入到抗潮霉素基因——终止子 之间呢,还是只能放在启动子后面?

[ Last edited by silicare on 2014-3-3 at 08:42 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yushijiang30

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 意孤城_ at 2014-02-22 15:17:34
我不明白一点,你要干扰的基因是真菌自身表达的还是?如果是自身表达为何又要转抗潮霉素基因?双重抑制?
表达siRNA或者shRNA的载体是个单独的,因为表达RNA的启动子一般和表达DNA的启动子是不一样的

我做的是通过真菌介导干扰害虫,把干扰载体转入真菌,在真菌入侵昆虫的时候释放干扰片段到昆虫体内。抗潮霉素基因是用来筛选阳性真菌的,你说的RNAi干扰的启动子不一样,我的启动子是真菌的色氨酸启动子,启动500bp左右的干扰片段,这样行吗
5楼2014-02-24 10:03:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
这个应该在前面吧。如果放在后面的话,在未表达基因之前,RNAi片段都已经断开了。我是这么认为的,不知道是不是这样。

还有,我现在做的克隆是分别的,按你的意思就是说1.启动子——抗潮霉素基因——终止子,2.启动子——正向+intron+反向片段——终止子。是两个载体,这是做植物的。
2楼2014-02-21 15:05:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

意孤城_

金虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-03-30 16:22:26
我不明白一点,你要干扰的基因是真菌自身表达的还是?如果是自身表达为何又要转抗潮霉素基因?双重抑制?
表达siRNA或者shRNA的载体是个单独的,因为表达RNA的启动子一般和表达DNA的启动子是不一样的
3楼2014-02-22 15:17:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
插入在潮霉素基因后端好些,我们RNAi都是单独一个表达盒驱动,你这样会影响潮霉素表达。
hehe
4楼2014-02-22 19:53:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的? +14 爱看书的可乐 2026-08-26 16/800 2026-08-26 18:28 by skyjudy
[基金申请] 系统查不到 +10 董八千 2026-08-26 10/500 2026-08-26 16:30 by Equinoxhua
[基金申请] 基金不中,共勉 +3 eulota 2026-08-26 3/150 2026-08-26 16:17 by 路yyyy
[基金申请] 怎么查啊 +5 huang1991js 2026-08-26 5/250 2026-08-26 16:09 by Equinoxhua
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +26 yaoyewhu2008 2026-08-20 28/1400 2026-08-26 13:49 by zzuzxg
[基金申请] 科研孤儿太难了 +21 我4大白菜 2026-08-20 22/1100 2026-08-26 11:29 by nlgza
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 明天应该可查了!? +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 22/1100 2026-08-25 15:36 by 医学老男孩
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑,不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[基金申请] 人气不行了 +11 fansofjerry 2026-08-21 11/550 2026-08-25 11:04 by 孤独的英雄6
[教师之家] 导师吐槽:我怎么摊上了这么个极品研究生! +3 苏东坡二世 2026-08-23 3/150 2026-08-25 10:35 by shisan1313
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 让我中一个面上吧! +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
信息提示
请填处理意见