24小时热门版块排行榜    

查看: 3103  |  回复: 12
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

yushijiang30

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于RNAi干扰的问题 已有3人参与

我做真菌的干扰,我构建好的干扰片段:正向+intron+反向片段能不能插入到一个开放阅读框的下游,比如启动子——抗潮霉素基因——终止子,我能不能把片段插入到抗潮霉素基因——终止子 之间呢,还是只能放在启动子后面?

[ Last edited by silicare on 2014-3-3 at 08:42 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yushijiang30

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 意孤城_ at 2014-02-22 15:17:34
我不明白一点,你要干扰的基因是真菌自身表达的还是?如果是自身表达为何又要转抗潮霉素基因?双重抑制?
表达siRNA或者shRNA的载体是个单独的,因为表达RNA的启动子一般和表达DNA的启动子是不一样的

我做的是通过真菌介导干扰害虫,把干扰载体转入真菌,在真菌入侵昆虫的时候释放干扰片段到昆虫体内。抗潮霉素基因是用来筛选阳性真菌的,你说的RNAi干扰的启动子不一样,我的启动子是真菌的色氨酸启动子,启动500bp左右的干扰片段,这样行吗
5楼2014-02-24 10:03:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
这个应该在前面吧。如果放在后面的话,在未表达基因之前,RNAi片段都已经断开了。我是这么认为的,不知道是不是这样。

还有,我现在做的克隆是分别的,按你的意思就是说1.启动子——抗潮霉素基因——终止子,2.启动子——正向+intron+反向片段——终止子。是两个载体,这是做植物的。
2楼2014-02-21 15:05:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

意孤城_

金虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-03-30 16:22:26
我不明白一点,你要干扰的基因是真菌自身表达的还是?如果是自身表达为何又要转抗潮霉素基因?双重抑制?
表达siRNA或者shRNA的载体是个单独的,因为表达RNA的启动子一般和表达DNA的启动子是不一样的
3楼2014-02-22 15:17:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
插入在潮霉素基因后端好些,我们RNAi都是单独一个表达盒驱动,你这样会影响潮霉素表达。
hehe
4楼2014-02-22 19:53:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 274求调剂 +7 顾九笙要谦虚 2026-03-24 7/350 2026-03-25 15:18 by baoball
[考研] 329求调剂 +3 钮恩雪 2026-03-25 3/150 2026-03-25 14:43 by 糖加冰
[考研] 0854电子信息求调剂 324 +4 Promise-jyl 2026-03-23 4/200 2026-03-25 11:36 by Sugarlight
[考研] 286求调剂 +11 Faune 2026-03-21 11/550 2026-03-25 10:11 by 雾散后相遇lc
[考研] 求调剂 一志愿 本科 北科大 化学 343 +4 13831862839 2026-03-24 5/250 2026-03-25 09:47 by 无际的草原
[考研] 07化学280分求调剂 +7 722865 2026-03-23 7/350 2026-03-25 09:29 by aa331100
[考研] 求调剂,一志愿:南京航空航天大学大学 ,080500材料科学与工程学硕,总分289分 +6 @taotao 2026-03-19 6/300 2026-03-25 08:37 by 木托莫露露
[考研] 080500求调剂 +3 zzzzfan 2026-03-24 3/150 2026-03-24 16:38 by barlinike
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-21 6/300 2026-03-24 15:03 by 余意卿
[考研] 321求调剂 +4 Ymlll 2026-03-24 4/200 2026-03-24 14:44 by sprinining
[考研] 一志愿吉大化学322求调剂 +4 17501029541 2026-03-23 6/300 2026-03-24 10:21 by 戴围脖的小蚊子
[考研] 276求调剂。有半年电池和半年高分子实习经历 +9 材料学257求调剂 2026-03-23 10/500 2026-03-24 07:36 by wangy0907
[考研] 284求调剂 +3 yanzhixue111 2026-03-23 6/300 2026-03-23 22:58 by pswait
[考研] 材料/农业专业,07/08开头均可,过线就行 +3 呵唔哦豁 2026-03-23 4/200 2026-03-23 22:30 by 汪!?!
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:09 by 星空星月
[考研] 266求调剂 +3 哇呼哼呼哼 2026-03-20 3/150 2026-03-21 16:46 by barlinike
[考研] 南京大学化学376求调剂 +3 hisfailed 2026-03-19 6/300 2026-03-20 23:43 by hisfailed
[考研] 330求调剂 +4 小材化本科 2026-03-18 4/200 2026-03-20 23:13 by JourneyLucky
[考研] 288求调剂 +16 于海海海海 2026-03-19 16/800 2026-03-20 22:28 by JourneyLucky
[考研] 320求调剂0856 +3 不想起名字112 2026-03-19 3/150 2026-03-19 22:53 by 学员8dgXkO
信息提示
请填处理意见