24小时热门版块排行榜    

查看: 637  |  回复: 6
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

梦过留声

金虫 (小有名气)

[求助] 请教高手:金属层析法分离蛋白是否会造成蛋白变性? 已有3人参与

最近在看金属层析法分离蛋白方面的文献,大多数文献利用Cu、Ni等金属离子与甘氨酸等氨基酸的特异性结合来实现蛋白质的分离,我不太清楚金属离子与蛋白结合后会否导致蛋白变性?蛋白质变性是由于空间结构发生变化,照这么看层析过程中,金属离子仅仅与蛋白质残留的氨基酸结合,是不是可以理解为没有破坏蛋白的结构?还是说层析过程造成蛋白活性降低,但是蛋白分离后将金属离子洗脱后,蛋白会复性? 跪求大侠解答,万分感谢!
回复此楼
加油!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

treetreew

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

亲和层析本身是不太会
倒是6个his容易被包住

变形靠rp,缓冲体系不合适,太容易变性了,前后经历好多缓冲体系,
至于变性了是不是可逆,理论上有一些是可逆的,但我看基本希望不大。
7楼2014-01-26 09:46:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

梦过留声

金虫 (小有名气)

坛子里这么多做蛋白纯化的高手都去哪了呢?
加油!
2楼2014-01-16 15:02:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wolfman840

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1.首先,金属离子螯合层析不会导致蛋白质变性。因为特异性结合的是蛋白质标签。
2.如果你纯化过程中的缓冲液条件摸索不好,蛋白质会变性,这个变性是可逆的。
3楼2014-01-17 15:24:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

梦过留声

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wolfman840 at 2014-01-17 15:24:01
1.首先,金属离子螯合层析不会导致蛋白质变性。因为特异性结合的是蛋白质标签。
2.如果你纯化过程中的缓冲液条件摸索不好,蛋白质会变性,这个变性是可逆的。

什么叫蛋白质标签?我是新手,求指导?还有,如果用金属离子螯合层析分离蛋白酶,分离后能保持酶的活性吗?
加油!
4楼2014-01-17 18:35:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见