24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 683  |  回复: 6

梦过留声

专家顾问

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

[求助] 请教高手:金属层析法分离蛋白是否会造成蛋白变性? 已有3人参与

最近在看金属层析法分离蛋白方面的文献,大多数文献利用Cu、Ni等金属离子与甘氨酸等氨基酸的特异性结合来实现蛋白质的分离,我不太清楚金属离子与蛋白结合后会否导致蛋白变性?蛋白质变性是由于空间结构发生变化,照这么看层析过程中,金属离子仅仅与蛋白质残留的氨基酸结合,是不是可以理解为没有破坏蛋白的结构?还是说层析过程造成蛋白活性降低,但是蛋白分离后将金属离子洗脱后,蛋白会复性? 跪求大侠解答,万分感谢!
回复此楼
加油!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

梦过留声

管理员

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

坛子里这么多做蛋白纯化的高手都去哪了呢?
加油!
2楼2014-01-16 15:02:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wolfman840

实习版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1.首先,金属离子螯合层析不会导致蛋白质变性。因为特异性结合的是蛋白质标签。
2.如果你纯化过程中的缓冲液条件摸索不好,蛋白质会变性,这个变性是可逆的。
3楼2014-01-17 15:24:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

梦过留声

超级版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
3楼: Originally posted by wolfman840 at 2014-01-17 15:24:01
1.首先,金属离子螯合层析不会导致蛋白质变性。因为特异性结合的是蛋白质标签。
2.如果你纯化过程中的缓冲液条件摸索不好,蛋白质会变性,这个变性是可逆的。

什么叫蛋白质标签?我是新手,求指导?还有,如果用金属离子螯合层析分离蛋白酶,分离后能保持酶的活性吗?
加油!
4楼2014-01-17 18:35:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

toplxb

版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖

我过去就做镍柱亲和层析纯化蛋白,温度一定要保持在4°,ph要略碱性,当时我做实验的时候是ph为8。不会变性,没有问题。
5楼2014-01-24 11:46:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wolfman840

版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖

1.蛋白质标签就是所谓的能和金属离子特异性结合的氨基酸,一般基因工程蛋白都会让目的蛋白连一个HIS的,现在就是所谓的HIS-tag。
2.如果要保持酶活性,需要掌握缓冲液的条件,尽量用温和的pH和离子条件进行纯化。
6楼2014-01-24 15:59:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

treetreew

管理员

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖

亲和层析本身是不太会
倒是6个his容易被包住

变形靠rp,缓冲体系不合适,太容易变性了,前后经历好多缓冲体系,
至于变性了是不是可逆,理论上有一些是可逆的,但我看基本希望不大。
7楼2014-01-26 09:46:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 梦过留声 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂:一志愿:南京大学 专业:0705 总分320 ,本科985,四六级已过 +3 lfy760306 2026-03-31 3/150 2026-04-01 01:57 by Creta
[考研] 环境工程 085701,267求调剂 +14 minht 2026-03-29 14/700 2026-04-01 01:42 by 1018329917
[考博] 26申博 +4 加油冲啊! 2026-03-26 4/200 2026-03-31 22:42 by greychen00
[考研] 318求调剂 +3 笃行致远. 2026-03-31 3/150 2026-03-31 20:27 by 求调剂zz
[考研] 求调剂,一志愿北林食品与营养095500,301分,已过六级,有科研经历 +3 快乐储蓄罐 2026-03-31 3/150 2026-03-31 20:20 by plum
[硕博家园] 求调剂 有机化学考研356分 +11 Nadiums 2026-03-25 12/600 2026-03-31 18:24 by oooqiao
[考研] 286分调剂 +11 Faune 2026-03-30 13/650 2026-03-31 17:28 by michael2011
[考研] 277跪求调剂 +8 1915668 2026-03-27 13/650 2026-03-31 14:58 by 王亮_大连医科大
[考研] 生物学 296 求调剂 +7 朵朵- 2026-03-26 9/450 2026-03-31 14:26 by jp9609
[考研] 266分,求材料冶金能源化工等调剂 +8 哇呼哼呼哼 2026-03-27 10/500 2026-03-31 13:35 by Huaxue_Wang
[考研] 266求调剂 +3 哇呼哼呼哼 2026-03-29 3/150 2026-03-31 10:06 by cal0306
[考研] 269求调剂 +4 我想读研11 2026-03-31 4/200 2026-03-31 10:04 by cal0306
[考研] 293分求调剂,外语为俄语 +5 加一一九 2026-03-31 5/250 2026-03-31 09:39 by zhshch
[考研] 292求调剂 +13 是妍子也是研子 2026-03-30 13/650 2026-03-30 18:01 by 小徐0109
[考研] 材料化工340求调剂 +3 jhx777 2026-03-30 3/150 2026-03-30 17:54 by JourneyLucky
[考研] 293求调剂 +3 末未mm 2026-03-30 5/250 2026-03-30 17:23 by 王保杰33
[考研] 332求调剂 +6 @MZB382400 2026-03-28 6/300 2026-03-30 16:57 by 无际的草原
[考研] 070300求调剂306分 +4 26要上岸 2026-03-27 4/200 2026-03-28 13:06 by 唐沐儿
[考研] 308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-27 7/350 2026-03-28 07:43 by 热情沙漠
[考研] 0703化学338求调剂! +6 Zuhui0306 2026-03-26 7/350 2026-03-27 10:35 by shangxh
信息提示
请填处理意见