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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请问各位大虾，做western时，分子量为21的蛋白用多大的分离胶呢？请赐教~~~~
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cathy521125

银虫 (初入文坛)

[求助] 请问各位大虾，做western时，分子量为21的蛋白用多大的分离胶呢？请赐教~~~~ 已有3人参与

小女子初做western，目的蛋白分子量为21，听很多人说分子量越大或是越小的蛋白不好跑，请问各位虫友、大侠们，你们在做小分子量目的蛋白的时候，分离胶时如何选择的呢？选择12%还是15%的呢？我的PVDF膜是0.2um的，蛋白应该是跑不过去的哈？还需不需要加大SDS的用量呢？
    请各位虫友、大虾们赐教，不胜感激！！！
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1楼 2013-12-27 16:16:58
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overhalfmoon

新虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-28 21:17:02
用12％，0.2um的膜孔径大小相当于19KD蛋白，所以转膜不用担心

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2013-12-27 17:49:18
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剑客心语

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-28 21:16:54
分子量为20多-30多的蛋白，我一般用10%的分离胶。SDS的用量不必过大。转膜：200mA 1.5h-2.0h
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一柄驻剑，一朝旅人，一颗常心，一生志言……行疆漫漫，品味一生……
2楼2013-12-27 16:35:57
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缤纷惠儿

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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2楼: Originally posted by 剑客心语 at 2013-12-27 16:35:57
分子量为20多-30多的蛋白，我一般用10%的分离胶。SDS的用量不必过大。转膜：200mA 1.5h-2.0h

20-30的蛋白用10%的胶肯定分不开，10%分离35—90的蛋白，一般20多的用12%的胶。
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吃亏是福，好人有好报
6楼2013-12-27 18:24:02
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缤纷惠儿

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cathy521125 at 2013-12-27 18:16:47
好的，谢谢，我用10%的跑过，可是没跑出来，你当时跑的蛋白分子量是多少啊？跑出来了吗？...

用12%的肯定能分离出来
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吃亏是福，好人有好报
7楼2013-12-27 18:24:36
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剑客心语

木虫 (小有名气)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-29 00:15:25
引用回帖:
4楼: Originally posted by cathy521125 at 2013-12-27 18:16:47
好的，谢谢，我用10%的跑过，可是没跑出来，你当时跑的蛋白分子量是多少啊？跑出来了吗？...

我曾经跑过一个25kDa的蛋白，10%的分离胶做出信号了。我的经验是大小在 10~20kd，浓缩胶10%，分离胶12%；20~80kDa，浓缩胶5%，分离胶10%。如果10%不可以，也可以试试12%。
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一柄驻剑，一朝旅人，一颗常心，一生志言……行疆漫漫，品味一生……
9楼2013-12-28 23:09:18
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普通回帖

cathy521125

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 剑客心语 at 2013-12-27 16:35:57
分子量为20多-30多的蛋白，我一般用10%的分离胶。SDS的用量不必过大。转膜：200mA 1.5h-2.0h

好的，谢谢，我用10%的跑过，可是没跑出来，你当时跑的蛋白分子量是多少啊？跑出来了吗？
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4楼2013-12-27 18:16:47
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cathy521125

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by overhalfmoon at 2013-12-27 17:49:18
用12％，0.2um的膜孔径大小相当于19KD蛋白，所以转膜不用担心

灰常感谢
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5楼2013-12-27 18:17:43
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cathy521125

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 缤纷惠儿 at 2013-12-27 18:24:02
20-30的蛋白用10%的胶肯定分不开，10%分离35—90的蛋白，一般20多的用12%的胶。...

那电泳80V、400mA，转膜300V、200mA，2小时，可以吗？
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8楼2013-12-27 18:43:07
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阿凡的小开
感谢分享
10楼2013-12-30 19:22:59
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