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cathy521125

银虫 (初入文坛)

[求助] 请问各位大虾,做western时,分子量为21的蛋白用多大的分离胶呢?请赐教~~~~已有3人参与

小女子初做western,目的蛋白分子量为21,听很多人说分子量越大或是越小的蛋白不好跑,请问各位虫友、大侠们,你们在做小分子量目的蛋白的时候,分离胶时如何选择的呢?选择12%还是15%的呢?我的PVDF膜是0.2um的,蛋白应该是跑不过去的哈?还需不需要加大SDS的用量呢?
    请各位虫友、大虾们赐教,不胜感激!!!
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cathy521125

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 缤纷惠儿 at 2013-12-27 18:24:02
20-30的蛋白用10%的胶肯定分不开,10%分离35—90的蛋白,一般20多的用12%的胶。...

那电泳80V、400mA,转膜300V、200mA,2小时,可以吗?
8楼2013-12-27 18:43:07
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剑客心语

木虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-28 21:16:54
分子量为20多-30多的蛋白,我一般用10%的分离胶。SDS的用量不必过大。转膜:200mA 1.5h-2.0h
一柄驻剑,一朝旅人,一颗常心,一生志言……行疆漫漫,品味一生……
2楼2013-12-27 16:35:57
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overhalfmoon

新虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-28 21:17:02
用12%,0.2um的膜孔径大小相当于19KD蛋白,所以转膜不用担心

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2013-12-27 17:49:18
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cathy521125

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 剑客心语 at 2013-12-27 16:35:57
分子量为20多-30多的蛋白,我一般用10%的分离胶。SDS的用量不必过大。转膜:200mA 1.5h-2.0h

好的,谢谢,我用10%的跑过,可是没跑出来,你当时跑的蛋白分子量是多少啊?跑出来了吗?
4楼2013-12-27 18:16:47
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