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西区五号楼

新虫 (小有名气)

[求助] 蓝白斑筛选困境啦已有10人参与

我在做蓝白斑筛选,按takara的说明书做的,结果没有蓝斑,只有模糊一片的白斑。是什么原因呢?
蓝白斑筛选困境啦
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 回帖置顶 2013-12-26 15:00:55
1. 感受态是否污染杂菌,做空感受态对照涂板。
2. 少涂些菌看是否是因为菌液太多。
3. 直接用空载体在xgal板上看是否是蓝斑。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

7楼2013-12-26 03:44:37
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普通回帖

朱多龙

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2013-12-25 20:56:55
涂得菌体太多了,要少涂一些复苏的菌液。是不是X-gal 有问题,还是诱导IPTG浓度太低?还有就是IPTG是在你倒平板的时候加的吗?是否温度过高?建议IPTG和X-gal 最后可以喝菌液混好后直接涂板,这样比较省事,而且诱导效果会比较好。
2楼2013-12-25 18:32:15
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西区五号楼

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 朱多龙 at 2013-12-25 18:32:15
涂得菌体太多了,要少涂一些复苏的菌液。是不是X-gal 有问题,还是诱导IPTG浓度太低?还有就是IPTG是在你倒平板的时候加的吗?是否温度过高?建议IPTG和X-gal 最后可以喝菌液混好后直接涂板,这样比较省事,而且诱导 ...

其实只涂了100ul菌液。IPTG和X-gal是复苏前涂的,IPTG(20mg/ml)涂了40ul,X-gal(20mg/ml)也是40ul。
3楼2013-12-25 19:04:58
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不叶珏

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2013-12-25 20:57:04
菌液太多 尝试减少到50ul + 5ul 连接产物
借你一生好不好
4楼2013-12-25 20:24:57
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朱多龙

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 西区五号楼 at 2013-12-25 19:04:58
其实只涂了100ul菌液。IPTG和X-gal是复苏前涂的,IPTG(20mg/ml)涂了40ul,X-gal(20mg/ml)也是40ul。...

正常这个浓度比例不会有问题的啊!考虑考虑X-gal 是否有问题,见光易失效。复苏前涂得是否避光。还有可以那其他的质粒做一下重复啊。 西区五号楼?在天津?我也在西区四号楼。
5楼2013-12-25 20:49:06
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西区五号楼

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 朱多龙 at 2013-12-25 20:49:06
正常这个浓度比例不会有问题的啊!考虑考虑X-gal 是否有问题,见光易失效。复苏前涂得是否避光。还有可以那其他的质粒做一下重复啊。 西区五号楼?在天津?我也在西区四号楼。...

不是的,我在陕西。你是说拿空质粒做一下对照吗?
6楼2013-12-25 21:18:26
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hjtywjb

银虫 (小有名气)

涂得均匀一些

[ 发自小木虫客户端 ]
8楼2013-12-26 09:23:29
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西区五号楼

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-26 03:44:37
1. 感受态是否污染杂菌,做空感受态对照涂板。
2. 少涂些菌看是否是因为菌液太多。
3. 直接用空载体在xgal板上看是否是蓝斑。

1和3总结起来就是讲空载体导入感受态,然后涂板吗?
9楼2013-12-26 09:27:42
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-26 15:01:09
引用回帖:
9楼: Originally posted by 西区五号楼 at 2013-12-26 09:27:42
1和3总结起来就是讲空载体导入感受态,然后涂板吗?...

1是感受态对照,只是把感受态细胞完全按照转化程序,熱激复苏涂抗性筛选板,看感受态细胞是否污染了杂菌或者是筛选板的筛选压力不足。
3是用空载体转化涂板,检查蓝白斑筛选系统的药品是不是失效。
10楼2013-12-26 11:01:40
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