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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蓝白斑筛选困境啦
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西区五号楼

新虫 (小有名气)

[求助] 蓝白斑筛选困境啦 已有10人参与

我在做蓝白斑筛选，按takara的说明书做的，结果没有蓝斑，只有模糊一片的白斑。是什么原因呢？
蓝白斑筛选困境啦
IMG_5386.jpg
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1楼 2013-12-25 16:14:36
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回帖置顶 ( 共有1个 )

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 回帖置顶 2013-12-26 15:00:55
1. 感受态是否污染杂菌，做空感受态对照涂板。
2. 少涂些菌看是否是因为菌液太多。
3. 直接用空载体在xgal板上看是否是蓝斑。
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

西区五号楼
7楼2013-12-26 03:44:37
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普通回帖

朱多龙

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2013-12-25 20:56:55
涂得菌体太多了，要少涂一些复苏的菌液。是不是X-gal 有问题，还是诱导IPTG浓度太低？还有就是IPTG是在你倒平板的时候加的吗？是否温度过高？建议IPTG和X-gal 最后可以喝菌液混好后直接涂板，这样比较省事，而且诱导效果会比较好。
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2楼2013-12-25 18:32:15
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西区五号楼

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 朱多龙 at 2013-12-25 18:32:15
涂得菌体太多了，要少涂一些复苏的菌液。是不是X-gal 有问题，还是诱导IPTG浓度太低？还有就是IPTG是在你倒平板的时候加的吗？是否温度过高？建议IPTG和X-gal 最后可以喝菌液混好后直接涂板，这样比较省事，而且诱导 ...

其实只涂了100ul菌液。IPTG和X-gal是复苏前涂的，IPTG（20mg/ml）涂了40ul，X-gal(20mg/ml)也是40ul。
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3楼2013-12-25 19:04:58
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不叶珏

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2013-12-25 20:57:04
菌液太多 尝试减少到50ul + 5ul 连接产物
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借你一生好不好
4楼2013-12-25 20:24:57
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朱多龙

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 西区五号楼 at 2013-12-25 19:04:58
其实只涂了100ul菌液。IPTG和X-gal是复苏前涂的，IPTG（20mg/ml）涂了40ul，X-gal(20mg/ml)也是40ul。...

正常这个浓度比例不会有问题的啊！考虑考虑X-gal 是否有问题，见光易失效。复苏前涂得是否避光。还有可以那其他的质粒做一下重复啊。 西区五号楼？在天津？我也在西区四号楼。
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5楼2013-12-25 20:49:06
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西区五号楼

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 朱多龙 at 2013-12-25 20:49:06
正常这个浓度比例不会有问题的啊！考虑考虑X-gal 是否有问题，见光易失效。复苏前涂得是否避光。还有可以那其他的质粒做一下重复啊。 西区五号楼？在天津？我也在西区四号楼。...

不是的，我在陕西。你是说拿空质粒做一下对照吗？
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6楼2013-12-25 21:18:26
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hjtywjb

银虫 (小有名气)
涂得均匀一些

[ 发自小木虫客户端 ]
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8楼2013-12-26 09:23:29
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西区五号楼

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-26 03:44:37
1. 感受态是否污染杂菌，做空感受态对照涂板。
2. 少涂些菌看是否是因为菌液太多。
3. 直接用空载体在xgal板上看是否是蓝斑。

1和3总结起来就是讲空载体导入感受态，然后涂板吗？
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9楼2013-12-26 09:27:42
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-26 15:01:09
引用回帖:
9楼: Originally posted by 西区五号楼 at 2013-12-26 09:27:42
1和3总结起来就是讲空载体导入感受态，然后涂板吗？...

1是感受态对照，只是把感受态细胞完全按照转化程序，熱激复苏涂抗性筛选板，看感受态细胞是否污染了杂菌或者是筛选板的筛选压力不足。
3是用空载体转化涂板，检查蓝白斑筛选系统的药品是不是失效。
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10楼2013-12-26 11:01:40
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