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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蓝白斑筛选困境啦
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西区五号楼

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-26 03:44:37
1. 感受态是否污染杂菌，做空感受态对照涂板。
2. 少涂些菌看是否是因为菌液太多。
3. 直接用空载体在xgal板上看是否是蓝斑。

还有，就是我是用核苷酸染料切胶回收的，这个是不是也有影响呢？
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11楼2013-12-26 11:03:33
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 西区五号楼 at 2013-12-26 11:03:33
还有，就是我是用核苷酸染料切胶回收的，这个是不是也有影响呢？...

虽然染料和UV照射对克隆的成功率有影响，不过不会造成杂菌污染。
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12楼2013-12-26 12:02:19
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sandisk411

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-26 15:01:20
好像是感受态细胞污染了，你的感受态细胞是自己做的，还是买的，感受态细胞里面貌似就有抗抗生素的质粒存在。另外，就是抗生素失效。
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13楼2013-12-26 12:19:01
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王者归来001

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-12-26 15:01:28
先把X-gal和 IPTG分别涂，尽量不要有模糊的后再涂菌 多涂几个浓度梯度就好了
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坚持不懈,终会成功!
14楼2013-12-26 14:02:28
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rabbitzumi

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-26 15:01:35
我感觉应该首先怀疑转化产物涂得过多，建议同一转化产物稀释10倍，100倍，1000倍，分别涂板。边缘还是可以看到一些单克隆的。
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青春无限宝贵，学海无涯驰骋
15楼2013-12-26 14:51:52
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西区五号楼

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-26 03:44:37
1. 感受态是否污染杂菌，做空感受态对照涂板。
2. 少涂些菌看是否是因为菌液太多。
3. 直接用空载体在xgal板上看是否是蓝斑。

你好，我配置氨苄的时候，发现时淡淡的黄色，不知道是不是有什么问题呢？
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16楼2013-12-30 20:47:50
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三蛰

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-31 00:43:25
这个比较简单，大家也说了很多建议。我做过直接把X-gal和IPTG 直接混到LB里到平板，以及同菌液混合涂平板，还有单独涂平板，这三种方法都能成功的筛选出阳性重组子。注意细节。
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我不会！
17楼2013-12-30 21:04:02
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西区五号楼

新虫 (小有名气)
引用回帖:
17楼: Originally posted by 三蛰 at 2013-12-30 21:04:02
这个比较简单，大家也说了很多建议。我做过直接把X-gal和IPTG 直接混到LB里到平板，以及同菌液混合涂平板，还有单独涂平板，这三种方法都能成功的筛选出阳性重组子。注意细节。

我最终发现时Amp的问题，我买的一个公司的，还说是进口的。结果就是不好使，借别人实验室的用立刻就出来蓝白斑了。但是我买的氨苄过滤后是淡淡的黄色，不知道能不能用，没敢用。想问一下，这能用吗？
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18楼2013-12-30 21:08:58
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lglgl

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-12-31 00:43:33
TAKARA的T载体就是蓝斑很少，不是每次都有的，PCR验证一下就行了
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19楼2013-12-30 22:54:20
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 西区五号楼 at 2013-12-30 20:47:50
你好，我配置氨苄的时候，发现时淡淡的黄色，不知道是不是有什么问题呢？...

氨苄通常是无色的，少许淡黄色可能是有些杂质或者部分变质。你可以配置一下抗性平板，摇空工程菌（如DH5α）涂板看是否有效。
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20楼2013-12-31 01:29:32
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