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西区五号楼

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-26 03:44:37
1. 感受态是否污染杂菌,做空感受态对照涂板。
2. 少涂些菌看是否是因为菌液太多。
3. 直接用空载体在xgal板上看是否是蓝斑。

还有,就是我是用核苷酸染料切胶回收的,这个是不是也有影响呢?
11楼2013-12-26 11:03:33
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 西区五号楼 at 2013-12-26 11:03:33
还有,就是我是用核苷酸染料切胶回收的,这个是不是也有影响呢?...

虽然染料和UV照射对克隆的成功率有影响,不过不会造成杂菌污染。
12楼2013-12-26 12:02:19
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sandisk411

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-26 15:01:20
好像是感受态细胞污染了,你的感受态细胞是自己做的,还是买的,感受态细胞里面貌似就有抗抗生素的质粒存在。另外,就是抗生素失效。
13楼2013-12-26 12:19:01
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王者归来001

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流! 2013-12-26 15:01:28
先把X-gal和 IPTG分别涂,尽量不要有模糊的后再涂菌 多涂几个浓度梯度就好了
坚持不懈,终会成功!
14楼2013-12-26 14:02:28
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rabbitzumi

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-26 15:01:35
我感觉应该首先怀疑转化产物涂得过多,建议同一转化产物稀释10倍,100倍,1000倍,分别涂板。边缘还是可以看到一些单克隆的。
青春无限宝贵,学海无涯驰骋
15楼2013-12-26 14:51:52
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西区五号楼

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-26 03:44:37
1. 感受态是否污染杂菌,做空感受态对照涂板。
2. 少涂些菌看是否是因为菌液太多。
3. 直接用空载体在xgal板上看是否是蓝斑。

你好,我配置氨苄的时候,发现时淡淡的黄色,不知道是不是有什么问题呢?
16楼2013-12-30 20:47:50
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三蛰

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-31 00:43:25
这个比较简单,大家也说了很多建议。我做过直接把X-gal和IPTG 直接混到LB里到平板,以及同菌液混合涂平板,还有单独涂平板,这三种方法都能成功的筛选出阳性重组子。注意细节。
我不会!
17楼2013-12-30 21:04:02
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西区五号楼

新虫 (小有名气)

引用回帖:
17楼: Originally posted by 三蛰 at 2013-12-30 21:04:02
这个比较简单,大家也说了很多建议。我做过直接把X-gal和IPTG 直接混到LB里到平板,以及同菌液混合涂平板,还有单独涂平板,这三种方法都能成功的筛选出阳性重组子。注意细节。

我最终发现时Amp的问题,我买的一个公司的,还说是进口的。结果就是不好使,借别人实验室的用立刻就出来蓝白斑了。但是我买的氨苄过滤后是淡淡的黄色,不知道能不能用,没敢用。想问一下,这能用吗?
18楼2013-12-30 21:08:58
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lglgl

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


gyesang: 金币+1, 鼓励交流! 2013-12-31 00:43:33
TAKARA的T载体就是蓝斑很少,不是每次都有的,PCR验证一下就行了
19楼2013-12-30 22:54:20
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
16楼: Originally posted by 西区五号楼 at 2013-12-30 20:47:50
你好,我配置氨苄的时候,发现时淡淡的黄色,不知道是不是有什么问题呢?...

氨苄通常是无色的,少许淡黄色可能是有些杂质或者部分变质。你可以配置一下抗性平板,摇空工程菌(如DH5α)涂板看是否有效。
20楼2013-12-31 01:29:32
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