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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蓝白斑筛选困境啦
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西区五号楼

新虫 (小有名气)

[求助] 蓝白斑筛选困境啦 已有10人参与

我在做蓝白斑筛选，按takara的说明书做的，结果没有蓝斑，只有模糊一片的白斑。是什么原因呢？
蓝白斑筛选困境啦
IMG_5386.jpg
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1楼 2013-12-25 16:14:36
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西区五号楼

新虫 (小有名气)
引用回帖:
17楼: Originally posted by 三蛰 at 2013-12-30 21:04:02
这个比较简单，大家也说了很多建议。我做过直接把X-gal和IPTG 直接混到LB里到平板，以及同菌液混合涂平板，还有单独涂平板，这三种方法都能成功的筛选出阳性重组子。注意细节。

我最终发现时Amp的问题，我买的一个公司的，还说是进口的。结果就是不好使，借别人实验室的用立刻就出来蓝白斑了。但是我买的氨苄过滤后是淡淡的黄色，不知道能不能用，没敢用。想问一下，这能用吗？
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18楼2013-12-30 21:08:58
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朱多龙

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2013-12-25 20:56:55
涂得菌体太多了，要少涂一些复苏的菌液。是不是X-gal 有问题，还是诱导IPTG浓度太低？还有就是IPTG是在你倒平板的时候加的吗？是否温度过高？建议IPTG和X-gal 最后可以喝菌液混好后直接涂板，这样比较省事，而且诱导效果会比较好。
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2楼2013-12-25 18:32:15
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西区五号楼

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 朱多龙 at 2013-12-25 18:32:15
涂得菌体太多了，要少涂一些复苏的菌液。是不是X-gal 有问题，还是诱导IPTG浓度太低？还有就是IPTG是在你倒平板的时候加的吗？是否温度过高？建议IPTG和X-gal 最后可以喝菌液混好后直接涂板，这样比较省事，而且诱导 ...

其实只涂了100ul菌液。IPTG和X-gal是复苏前涂的，IPTG（20mg/ml）涂了40ul，X-gal(20mg/ml)也是40ul。
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3楼2013-12-25 19:04:58
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不叶珏

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2013-12-25 20:57:04
菌液太多 尝试减少到50ul + 5ul 连接产物
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借你一生好不好
4楼2013-12-25 20:24:57
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查看全部 24 个回答
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