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西区五号楼

新虫 (小有名气)

[求助] 蓝白斑筛选困境啦 已有10人参与

我在做蓝白斑筛选,按takara的说明书做的,结果没有蓝斑,只有模糊一片的白斑。是什么原因呢?
蓝白斑筛选困境啦
IMG_5386.jpg
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三蛰

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-31 00:43:25
这个比较简单,大家也说了很多建议。我做过直接把X-gal和IPTG 直接混到LB里到平板,以及同菌液混合涂平板,还有单独涂平板,这三种方法都能成功的筛选出阳性重组子。注意细节。
我不会!
17楼2013-12-30 21:04:02
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朱多龙

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2013-12-25 20:56:55
涂得菌体太多了,要少涂一些复苏的菌液。是不是X-gal 有问题,还是诱导IPTG浓度太低?还有就是IPTG是在你倒平板的时候加的吗?是否温度过高?建议IPTG和X-gal 最后可以喝菌液混好后直接涂板,这样比较省事,而且诱导效果会比较好。
2楼2013-12-25 18:32:15
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西区五号楼

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 朱多龙 at 2013-12-25 18:32:15
涂得菌体太多了,要少涂一些复苏的菌液。是不是X-gal 有问题,还是诱导IPTG浓度太低?还有就是IPTG是在你倒平板的时候加的吗?是否温度过高?建议IPTG和X-gal 最后可以喝菌液混好后直接涂板,这样比较省事,而且诱导 ...

其实只涂了100ul菌液。IPTG和X-gal是复苏前涂的,IPTG(20mg/ml)涂了40ul,X-gal(20mg/ml)也是40ul。
3楼2013-12-25 19:04:58
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不叶珏

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2013-12-25 20:57:04
菌液太多 尝试减少到50ul + 5ul 连接产物
借你一生好不好
4楼2013-12-25 20:24:57
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