24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 2204  |  回复: 23
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

西区五号楼

新虫 (小有名气)

[求助] 蓝白斑筛选困境啦已有10人参与

我在做蓝白斑筛选,按takara的说明书做的,结果没有蓝斑,只有模糊一片的白斑。是什么原因呢?
蓝白斑筛选困境啦
IMG_5386.jpg
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-26 15:01:09
引用回帖:
9楼: Originally posted by 西区五号楼 at 2013-12-26 09:27:42
1和3总结起来就是讲空载体导入感受态,然后涂板吗?...

1是感受态对照,只是把感受态细胞完全按照转化程序,熱激复苏涂抗性筛选板,看感受态细胞是否污染了杂菌或者是筛选板的筛选压力不足。
3是用空载体转化涂板,检查蓝白斑筛选系统的药品是不是失效。
10楼2013-12-26 11:01:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 24 个回答

朱多龙

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2013-12-25 20:56:55
涂得菌体太多了,要少涂一些复苏的菌液。是不是X-gal 有问题,还是诱导IPTG浓度太低?还有就是IPTG是在你倒平板的时候加的吗?是否温度过高?建议IPTG和X-gal 最后可以喝菌液混好后直接涂板,这样比较省事,而且诱导效果会比较好。
2楼2013-12-25 18:32:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西区五号楼

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 朱多龙 at 2013-12-25 18:32:15
涂得菌体太多了,要少涂一些复苏的菌液。是不是X-gal 有问题,还是诱导IPTG浓度太低?还有就是IPTG是在你倒平板的时候加的吗?是否温度过高?建议IPTG和X-gal 最后可以喝菌液混好后直接涂板,这样比较省事,而且诱导 ...

其实只涂了100ul菌液。IPTG和X-gal是复苏前涂的,IPTG(20mg/ml)涂了40ul,X-gal(20mg/ml)也是40ul。
3楼2013-12-25 19:04:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

不叶珏

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2013-12-25 20:57:04
菌液太多 尝试减少到50ul + 5ul 连接产物
借你一生好不好
4楼2013-12-25 20:24:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见