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相互作用蛋白通过分子筛后洗脱时间为什么延长?
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LZ现在在做两个蛋白的相互作用,在E。coli里面分别表达两种蛋白并用HIS标签纯化后成功得到大量两种蛋白。然后在体外混合两种蛋白后过分子筛,发现两种蛋白的洗脱时间都延长了(怀疑两个蛋白都变小了?), 但是把过柱子后收集的样品跑SDS电泳后发现两种蛋白大小都未变化,请大家说下还有什么可能的原因? 以下先排除几种可能: 1,柱子是预装柱没有问题,且做过上述试验后,又用同一个柱子分别跑了两种蛋白,分子量和预期相同。 2,其中一个蛋白是单体,另外一个是4聚体。如果四聚体变小了有这种可能,但是另外一个蛋白是单体,无论如何也不会变小的。 请大家不吝指教,多谢了! |
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