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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 粮油与蛋白 » 小麦醇溶蛋白的酸性电泳
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一分零一秒

新虫 (初入文坛)

[求助] 小麦醇溶蛋白的酸性电泳

有谁做过小麦醇溶蛋白的酸性电泳，分离胶、浓缩胶的配比是多少，还有样品是如何处理的，参考了一些文献，我做了两个星期了，也没做出结果，急切，求助！
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1楼 2012-12-25 17:35:50
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回帖置顶 ( 共有1个 )

xiaojun542

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hsd3521: 回帖置顶 2012-12-26 15:02:25
一分零一秒: 金币+20, ★★★很有帮助 2012-12-27 13:58:41
你提到没有条带跑出，只有最上面一个宽条带。可能有以下原因，供你参考。
1、样品浓度是否合适，建议采用样品浓度梯度的方法选一个最佳的样品浓度或上样量；
2、胶浓度是否合适，主要是分离胶浓度要合适；浓缩胶对于结果影响不大，有些人不用浓缩胶也能跑出很好的条带；
3、提取过程是否合适，建议在查阅一些文献资料。
电泳试验是一个慢慢摸索的过程，有时候出现了问题需要不断的实验找出原因，再多实验几次，看看效果。
这方面的文献资料也挺多，重点关注一些关于电泳条件方面的文章。
http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_xbnydxxb200709012.aspx
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4楼2012-12-26 13:14:32
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普通回帖

留级生2005

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
一分零一秒: 金币+10, ★有帮助 2012-12-26 10:52:54
给你一篇参考文献参考：http://www.doc88.com/p-47249501721.html
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2楼2012-12-25 22:39:39
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一分零一秒

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 留级生2005 at 2012-12-25 22:39:39
给你一篇参考文献参考：http://www.doc88.com/p-47249501721.html

谢谢帮助，我看过这篇文献了，但样品提取液2-氯乙醇貌似有剧毒，我用了乙二醇提取，再加入含有甲基绿的甲酸溶液，别的也差不多，就是没有加入剥离硅胶，所以胶不好剥，但关键是没有条带跑出啊，只有最上面的一个宽条带。
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3楼2012-12-26 10:52:19
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一分零一秒

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by xiaojun542 at 2012-12-26 13:14:32
你提到没有条带跑出，只有最上面一个宽条带。可能有以下原因，供你参考。
1、样品浓度是否合适，建议采用样品浓度梯度的方法选一个最佳的样品浓度或上样量；
2、胶浓度是否合适，主要是分离胶浓度要合适；浓缩胶对 ...

谢谢，有个老师建议把分离胶的浓度降低，延长电泳时间，我试了试，还是不行，我再摸索摸索吧！
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5楼2012-12-27 13:58:18
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xiaojun542

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
一分零一秒: 金币+20, ★★★很有帮助 2012-12-28 08:52:38
引用回帖:
5楼: Originally posted by 一分零一秒 at 2012-12-27 13:58:18
谢谢，有个老师建议把分离胶的浓度降低，延长电泳时间，我试了试，还是不行，我再摸索摸索吧！...

把分离胶的浓度降低,跑出的条带是什么样的？是在靠近上样一侧，还是在最前端啊？如果在靠近上样一侧，那么胶浓度大了；如果在最前端，胶浓度小了。
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6楼2012-12-27 16:06:14
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一分零一秒

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by xiaojun542 at 2012-12-27 16:06:14
把分离胶的浓度降低,跑出的条带是什么样的？是在靠近上样一侧，还是在最前端啊？如果在靠近上样一侧，那么胶浓度大了；如果在最前端，胶浓度小了。...

开始用10%分离胶，是在泳道的最前端，降低分离胶浓度时，看到整个泳道有跑过的痕迹，但看不到条带。不知道你说“如果在靠近上样一侧，那么胶浓度大了；如果在最前端，胶浓度小了。”是什么原理呢？
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7楼2012-12-28 08:52:15
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xiaojun542

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 一分零一秒 at 2012-12-28 08:52:15
开始用10%分离胶，是在泳道的最前端，降低分离胶浓度时，看到整个泳道有跑过的痕迹，但看不到条带。不知道你说“如果在靠近上样一侧，那么胶浓度大了；如果在最前端，胶浓度小了。”是什么原理呢？...

降低分离胶浓度时，看到整个泳道有跑过的痕迹，但看不到条带,这可能是上样量太大造成的，蛋白没有完全分开
如果在靠近上样一侧，那么胶浓度大了；如果在最前端，胶浓度小了；这句话可以这样理解：当分离胶浓度大时，所有蛋白质都不能通过分离胶，那么它们就会全部积聚在上样一侧，当分离胶浓度大时，所有蛋白质都通过了分离胶，没有分子筛的作用，所以蛋白质都在分离胶的最前端。
不知道你理解了吗？如果不清楚找本生化实验书再看看，呵呵！
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8楼2012-12-28 09:04:43
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一分零一秒

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by xiaojun542 at 2012-12-28 09:04:43
降低分离胶浓度时，看到整个泳道有跑过的痕迹，但看不到条带,这可能是上样量太大造成的，蛋白没有完全分开
如果在靠近上样一侧，那么胶浓度大了；如果在最前端，胶浓度小了；这句话可以这样理解：当分离胶浓度大时 ...

哦，理解了，多谢啊！
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9楼2012-12-29 09:08:04
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小王在工大

金虫 (正式写手)
我用的方法是小麦酸溶蛋白的酸性电泳，条带老是不清楚，不知道什么原因，求解！
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为了遇见你，我连呼吸都反复练习
10楼2013-08-11 15:47:38
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