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一分零一秒

新虫 (初入文坛)

[求助] 小麦醇溶蛋白的酸性电泳

有谁做过小麦醇溶蛋白的酸性电泳,分离胶、浓缩胶的配比是多少,还有样品是如何处理的,参考了一些文献,我做了两个星期了,也没做出结果,急切,求助!
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xiaojun542

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
hsd3521: 回帖置顶 2012-12-26 15:02:25
一分零一秒: 金币+20, ★★★很有帮助 2012-12-27 13:58:41
你提到没有条带跑出,只有最上面一个宽条带。可能有以下原因,供你参考。
1、样品浓度是否合适,建议采用样品浓度梯度的方法选一个最佳的样品浓度或上样量;
2、胶浓度是否合适,主要是分离胶浓度要合适;浓缩胶对于结果影响不大,有些人不用浓缩胶也能跑出很好的条带;
3、提取过程是否合适,建议在查阅一些文献资料。
电泳试验是一个慢慢摸索的过程,有时候出现了问题需要不断的实验找出原因,再多实验几次,看看效果。
这方面的文献资料也挺多,重点关注一些关于电泳条件方面的文章。
http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_xbnydxxb200709012.aspx
4楼2012-12-26 13:14:32
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留级生2005

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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感谢参与,应助指数 +1
一分零一秒: 金币+10, 有帮助 2012-12-26 10:52:54
给你一篇参考文献参考:http://www.doc88.com/p-47249501721.html
2楼2012-12-25 22:39:39
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一分零一秒

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 留级生2005 at 2012-12-25 22:39:39
给你一篇参考文献参考:http://www.doc88.com/p-47249501721.html

谢谢帮助,我看过这篇文献了,但样品提取液2-氯乙醇貌似有剧毒,我用了乙二醇提取,再加入含有甲基绿的甲酸溶液,别的也差不多,就是没有加入剥离硅胶,所以胶不好剥,但关键是没有条带跑出啊,只有最上面的一个宽条带。
3楼2012-12-26 10:52:19
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一分零一秒

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by xiaojun542 at 2012-12-26 13:14:32
你提到没有条带跑出,只有最上面一个宽条带。可能有以下原因,供你参考。
1、样品浓度是否合适,建议采用样品浓度梯度的方法选一个最佳的样品浓度或上样量;
2、胶浓度是否合适,主要是分离胶浓度要合适;浓缩胶对 ...

谢谢,有个老师建议把分离胶的浓度降低,延长电泳时间,我试了试,还是不行,我再摸索摸索吧!
5楼2012-12-27 13:58:18
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xiaojun542

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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一分零一秒: 金币+20, ★★★很有帮助 2012-12-28 08:52:38
引用回帖:
5楼: Originally posted by 一分零一秒 at 2012-12-27 13:58:18
谢谢,有个老师建议把分离胶的浓度降低,延长电泳时间,我试了试,还是不行,我再摸索摸索吧!...

把分离胶的浓度降低,跑出的条带是什么样的?是在靠近上样一侧,还是在最前端啊?如果在靠近上样一侧,那么胶浓度大了;如果在最前端,胶浓度小了。
6楼2012-12-27 16:06:14
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一分零一秒

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by xiaojun542 at 2012-12-27 16:06:14
把分离胶的浓度降低,跑出的条带是什么样的?是在靠近上样一侧,还是在最前端啊?如果在靠近上样一侧,那么胶浓度大了;如果在最前端,胶浓度小了。...

开始用10%分离胶,是在泳道的最前端,降低分离胶浓度时,看到整个泳道有跑过的痕迹,但看不到条带。不知道你说“如果在靠近上样一侧,那么胶浓度大了;如果在最前端,胶浓度小了。”是什么原理呢?
7楼2012-12-28 08:52:15
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xiaojun542

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 一分零一秒 at 2012-12-28 08:52:15
开始用10%分离胶,是在泳道的最前端,降低分离胶浓度时,看到整个泳道有跑过的痕迹,但看不到条带。不知道你说“如果在靠近上样一侧,那么胶浓度大了;如果在最前端,胶浓度小了。”是什么原理呢?...

降低分离胶浓度时,看到整个泳道有跑过的痕迹,但看不到条带,这可能是上样量太大造成的,蛋白没有完全分开
如果在靠近上样一侧,那么胶浓度大了;如果在最前端,胶浓度小了;这句话可以这样理解:当分离胶浓度大时,所有蛋白质都不能通过分离胶,那么它们就会全部积聚在上样一侧,当分离胶浓度大时,所有蛋白质都通过了分离胶,没有分子筛的作用,所以蛋白质都在分离胶的最前端。
不知道你理解了吗?如果不清楚找本生化实验书再看看,呵呵!
8楼2012-12-28 09:04:43
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一分零一秒

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by xiaojun542 at 2012-12-28 09:04:43
降低分离胶浓度时,看到整个泳道有跑过的痕迹,但看不到条带,这可能是上样量太大造成的,蛋白没有完全分开
如果在靠近上样一侧,那么胶浓度大了;如果在最前端,胶浓度小了;这句话可以这样理解:当分离胶浓度大时 ...

哦,理解了,多谢啊!
9楼2012-12-29 09:08:04
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小王在工大

金虫 (正式写手)

我用的方法是小麦酸溶蛋白的酸性电泳,条带老是不清楚,不知道什么原因,求解!
为了遇见你,我连呼吸都反复练习
10楼2013-08-11 15:47:38
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