24小时热门版块排行榜    

查看: 1735  |  回复: 9

potata

金虫 (正式写手)

[交流] 酶切 酶连 载体构建 part7 part27 已有3人参与

最近在用part7 part27构建载体,用习惯LR反应的人再用酶切、酶连构建载体,真是麻烦!
快酶、慢酶都用了,takara, fermantas ,NEB的酶都用了;
各有优缺点,最后比较起来takara的慢酶相对还是不错;
再说连接,片段比较大,连接T载体的时候就很难连,现在连接part7 和27也很难,不停地大量做菌液PCR筛选,累死;
现在还在工作中。
来这里,想和有同样经历的虫友分享一下,不知道有没有感兴趣的?
回复此楼
cultivationeducation
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

woshishui916

木虫 (著名写手)

能再具体说说看不?
2楼2013-12-22 19:06:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

potata

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by woshishui916 at 2013-12-22 19:06:58
能再具体说说看不?

期望酶切后,回收片段,再连接,可是总是切不出理想的条带;而连接的时候,因为是平末端,且连接片段都很大,2k,到4k多,连接也比较困难!
不知道,有什么好方法或建议?
cultivationeducation
3楼2013-12-22 22:26:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

woshishui916

木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by potata at 2013-12-22 22:26:43
期望酶切后,回收片段,再连接,可是总是切不出理想的条带;而连接的时候,因为是平末端,且连接片段都很大,2k,到4k多,连接也比较困难!
不知道,有什么好方法或建议?...

试试无缝克隆吧
4楼2013-12-22 22:46:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

potata

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by woshishui916 at 2013-12-22 22:46:10
试试无缝克隆吧...

不知道连接效率和产品介绍的相比如何?哪家公司的较好?
cultivationeducation
5楼2013-12-22 22:58:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kinshi

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
平末端加peg试试,目的片段摩尔浓度是载体大概5倍,大片段本来就不是很好连更何况还是平端

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
6楼2013-12-22 23:02:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

woshishui916

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by potata at 2013-12-22 22:58:57
不知道连接效率和产品介绍的相比如何?哪家公司的较好?...

效率是很好的
公司,论坛不让提啊
版主会禁言的,有广告的嫌疑
7楼2013-12-22 23:04:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

potata

金虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by woshishui916 at 2013-12-22 23:04:15
效率是很好的
公司,论坛不让提啊
版主会禁言的,有广告的嫌疑...

非常感谢
cultivationeducation
8楼2013-12-23 11:26:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sinoer

铜虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我们基本天天构建数十个载体,呵呵
9楼2013-12-23 11:52:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

potata

金虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by sinoer at 2013-12-23 11:52:01
我们基本天天构建数十个载体,呵呵

你太牛了
cultivationeducation
10楼2013-12-23 12:00:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 potata 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +4 angus9576 2026-08-17 8/400 2026-08-17 17:26 by angus9576
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +8 wangze12014 2026-08-14 10/500 2026-08-17 17:05 by xter9665
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +34 医学老男孩 2026-08-13 81/4050 2026-08-17 16:20 by yudaoqian88
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
信息提示
请填处理意见