24小时热门版块排行榜    

查看: 1704  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

potata

金虫 (正式写手)

[交流] 酶切 酶连 载体构建 part7 part27 已有3人参与

最近在用part7 part27构建载体,用习惯LR反应的人再用酶切、酶连构建载体,真是麻烦!
快酶、慢酶都用了,takara, fermantas ,NEB的酶都用了;
各有优缺点,最后比较起来takara的慢酶相对还是不错;
再说连接,片段比较大,连接T载体的时候就很难连,现在连接part7 和27也很难,不停地大量做菌液PCR筛选,累死;
现在还在工作中。
来这里,想和有同样经历的虫友分享一下,不知道有没有感兴趣的?
回复此楼
cultivationeducation
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

potata

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by woshishui916 at 2013-12-22 22:46:10
试试无缝克隆吧...

不知道连接效率和产品介绍的相比如何?哪家公司的较好?
cultivationeducation
5楼2013-12-22 22:58:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

woshishui916

木虫 (著名写手)

能再具体说说看不?
2楼2013-12-22 19:06:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

potata

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by woshishui916 at 2013-12-22 19:06:58
能再具体说说看不?

期望酶切后,回收片段,再连接,可是总是切不出理想的条带;而连接的时候,因为是平末端,且连接片段都很大,2k,到4k多,连接也比较困难!
不知道,有什么好方法或建议?
cultivationeducation
3楼2013-12-22 22:26:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

woshishui916

木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by potata at 2013-12-22 22:26:43
期望酶切后,回收片段,再连接,可是总是切不出理想的条带;而连接的时候,因为是平末端,且连接片段都很大,2k,到4k多,连接也比较困难!
不知道,有什么好方法或建议?...

试试无缝克隆吧
4楼2013-12-22 22:46:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +5 布布和一二 2026-08-10 5/250 2026-08-11 09:17 by xiaruohan
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +4 Tide man 2026-08-10 4/200 2026-08-11 07:45 by emeraldine
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +4 瞬息宇宙 2026-08-10 4/200 2026-08-11 02:02 by 旁观2020
[基金申请] 基金中了 +15 laoda193707 2026-08-06 15/750 2026-08-11 00:11 by jiafei2190
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +10 yufeiwaner 2026-08-09 11/550 2026-08-10 18:47 by yufeiwaner
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 静等基金结果 +5 gjjjzhong 2026-08-10 16/800 2026-08-10 17:19 by Tide man
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +8 家与远方 2026-08-10 11/550 2026-08-10 17:09 by 六两废铜
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +3 majunge000 2026-08-10 3/150 2026-08-10 15:46 by lch2012
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +14 Lanmanbaby 2026-08-09 22/1100 2026-08-10 14:57 by wwncly
[基金申请] 好奇怪的filecode +4 布布和一二 2026-08-08 5/250 2026-08-10 14:20 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 有没有H口的?有收到消息的吗? +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
信息提示
请填处理意见