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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 唯一碳源实验
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Leo要努力啊

金虫 (初入文坛)

[求助] 唯一碳源实验 已有11人参与

本人最近在做一个海洋细菌是否能利用一种特殊的有机物作为唯一碳源的实验，基础培养基用的是MAMS（成分只包括一些常见的无机盐和维生素母液和微量元素母液，我看了又看这里面中唯一可能出问题的就是维生素了，但查了文献资料他们在做这个实验的时候确实也加入了维生素，而且我的知识告诉俺维生素无法作为生物体的碳源为其提供能量，只是有起一些生长因子的辅酶辅基的作用，所以我就毅然决然的加了）

我的实验组是在基础培养基中加入了我的目的碳源，而阴性对照组没有加任何碳源只有基础培养基（固体平板（2%琼脂）和液体都做了，所以应该不是琼脂的问题），结果这两个里面的细菌的生长情况竟然几乎是一样一样的，才培养了12个小时而已都能看到明显的生长，于是乎俺就纳闷了，在没有碳源的阴性对照组中细菌是怎么生长起来的，而且生长情况竟然跟实验组旗鼓相当？（所有的使用的器皿都用三蒸水仔细刷过，灭菌锅里面的水灭菌前都用一蒸水换了两遍）

我猜想的可能的原因可能是，不知道对不对：
1、药品除了氯化钠之外我用的都不是新开封的，可能会有有机物污染（但是我又想了想这个量应该很小，细菌用这么一点有机物也不能长这么快吧）
2、我在接种到这个唯一碳源培养基的时候是从完全培养基上面刮取的菌落，并没有洗涤菌体（这步我也不知道是不是必须的，做的时候忘记考虑这一点了），会不会菌体从培养基中带下来了微量的碳有机物，或者是细菌用的根本就是自身体的有机物生长的（如果是这样也应该看不到有明显的生长吧，不能自己利用自己的东西，自身的体积和数量还会变大吧）？

向各位大虾求助啊，望有经验的你能抽出几分钟的时间不吝赐教，万分感激！

我这个实验除了应该加一步洗涤菌体和使用新开封的药品之外还应该做怎样改进，哪个地方是有错误的么（是否应该加入维生素）？有没有谁知道能否从试剂公司直接买到不含有机物的专门做唯一碳源实验的基础培养基呢？
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1楼 2013-12-20 21:24:46
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zjcgss

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是否可以考虑延长生长时间，消耗掉对照的有机物

[ 发自小木虫客户端 ]
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5楼2013-12-21 07:56:01
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六月守望

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可能是你所选的药物的中混入有机物，建议换纯度高的、未经污染的
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2楼2013-12-20 21:51:38
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战斗节能

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
个人觉得应该不是琼脂的问题这种可能就要在看看，我印象里记得以前配培养基时导师说过琼脂纯度不高，会有杂质。我也不太清楚会不会有。
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3楼2013-12-20 22:38:43
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 感谢发帖应助，帮助虫子 2013-12-22 23:12:06
amisking: 回帖置顶 2013-12-22 23:12:07
Leo要努力啊: 金币+9, ★有帮助, 第一个帮助的人 谢谢啦 2013-12-24 20:29:24
1.确实可能存在试剂存在有机物的情况，特别是琼脂，而且你配培养基用的水可能也含有有机质。
2.你说你接种的时候是从完全培养基上刮取的菌落，这个不可避免将会引入有机质。而且你是怎么接种的，划线？其实你可以试试用10ul的小枪头轻轻沾一点完全培养基上的菌落，不用挑多，也别碰到培养基了，然后把枪头在少量（具体加多少自己确定）的灭菌水（最好是蒸馏水）里涮几下，等于是做了个很低浓度的菌悬液。之后涂平板。涂一个阴性对照，涂一个特殊碳源的，还可以涂一个完全培养基的平板做一个阳性对照，如果你对你的琼脂不放心也可以涂一个只含琼脂的平板。当然也可以按你说的洗涤一下菌体，然后划线~~
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大家相互帮助哈
4楼2013-12-21 01:15:08
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