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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 唯一碳源实验
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Leo要努力啊

金虫 (初入文坛)

[求助] 唯一碳源实验 已有11人参与

本人最近在做一个海洋细菌是否能利用一种特殊的有机物作为唯一碳源的实验，基础培养基用的是MAMS（成分只包括一些常见的无机盐和维生素母液和微量元素母液，我看了又看这里面中唯一可能出问题的就是维生素了，但查了文献资料他们在做这个实验的时候确实也加入了维生素，而且我的知识告诉俺维生素无法作为生物体的碳源为其提供能量，只是有起一些生长因子的辅酶辅基的作用，所以我就毅然决然的加了）

我的实验组是在基础培养基中加入了我的目的碳源，而阴性对照组没有加任何碳源只有基础培养基（固体平板（2%琼脂）和液体都做了，所以应该不是琼脂的问题），结果这两个里面的细菌的生长情况竟然几乎是一样一样的，才培养了12个小时而已都能看到明显的生长，于是乎俺就纳闷了，在没有碳源的阴性对照组中细菌是怎么生长起来的，而且生长情况竟然跟实验组旗鼓相当？（所有的使用的器皿都用三蒸水仔细刷过，灭菌锅里面的水灭菌前都用一蒸水换了两遍）

我猜想的可能的原因可能是，不知道对不对：
1、药品除了氯化钠之外我用的都不是新开封的，可能会有有机物污染（但是我又想了想这个量应该很小，细菌用这么一点有机物也不能长这么快吧）
2、我在接种到这个唯一碳源培养基的时候是从完全培养基上面刮取的菌落，并没有洗涤菌体（这步我也不知道是不是必须的，做的时候忘记考虑这一点了），会不会菌体从培养基中带下来了微量的碳有机物，或者是细菌用的根本就是自身体的有机物生长的（如果是这样也应该看不到有明显的生长吧，不能自己利用自己的东西，自身的体积和数量还会变大吧）？

向各位大虾求助啊，望有经验的你能抽出几分钟的时间不吝赐教，万分感激！

我这个实验除了应该加一步洗涤菌体和使用新开封的药品之外还应该做怎样改进，哪个地方是有错误的么（是否应该加入维生素）？有没有谁知道能否从试剂公司直接买到不含有机物的专门做唯一碳源实验的基础培养基呢？
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1楼 2013-12-20 21:24:46
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Leo要努力啊

金虫 (初入文坛)
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3楼: Originally posted by 战斗节能 at 2013-12-20 22:38:43
个人觉得应该不是琼脂的问题这种可能就要在看看，我印象里记得以前配培养基时导师说过琼脂纯度不高，会有杂质。我也不太清楚会不会有。

我觉得不是琼脂的问题，因为没有加琼脂的液体里面也有生长……
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8楼2013-12-21 22:24:51
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Leo要努力啊

金虫 (初入文坛)
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5楼: Originally posted by zjcgss at 2013-12-21 07:56:01
是否可以考虑延长生长时间，消耗掉对照的有机物

恩啊 我现在就在等 看看那延长生长时间之后会有什么效果，那您觉得他十二个小时以内会是因为什么而生长的呢？延长了时间之后，如果消耗完了对照的有机物之后，大概会有什么现象，菌落是不再变大还是越来越小最后干瘪掉？最后，谢谢您这次的帮助啦！
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9楼2013-12-21 22:34:38
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Leo要努力啊

金虫 (初入文坛)
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5楼: Originally posted by zjcgss at 2013-12-21 07:56:01
是否可以考虑延长生长时间，消耗掉对照的有机物

嗯啊 我现在就在延长培养时间看生长的情况 还有请问您那他现在12小时以内的生长是什么原因呢，会是哪里引入的有机物？如果真像您说的消耗掉了对照的有机物之后会有什么现象呢，菌苔不再变大还是越来越小最后干瘪？
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10楼2013-12-21 22:36:33
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Leo要努力啊

金虫 (初入文坛)
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6楼: Originally posted by wmwnyxt at 2013-12-21 16:17:36
若是排除上述两个原因，LZ可以尝试再加两组对照试验，
1. 加唯一碳源不加维生素。
2. 既不加碳源也不加维生素
另外，虽然大多细菌是不能利用琼脂的，但少量的细菌也是可以利用的，不过按照LZ所说液体与固体的情 ...

嗯啊 我下次就打算不加维生素试试了 如果延迟培养时间会出现什么现象呢？是对照中的微量有机物消耗完毕，菌体死亡么，那么菌落是会变小还是不再变大？然后跟实验组的比较，如果实验组的菌落还正常生长就说明能利用这种唯一碳源么？ 最后，谢谢您的帮助！
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11楼2013-12-21 22:39:37
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Leo要努力啊

金虫 (初入文坛)
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7楼: Originally posted by caisanrenju at 2013-12-21 16:55:04
1. 种子培养基中残余碳源是否很多？接种量是多少？开始12小时长得速度相同，之后呢？
2. 氮源是什么，是否为有机氮源？如是，可作为碳源。
3. 不可能是疑维生素。除非加过量。

1.我是从固体平板上用10μL的枪头沾取的少量菌苔点在新的实验平板上的，之后的还在观察中。
2.氮源是无机物，硫酸铵。
3.维生素加入很微量，俺照老外文献里面的量加的，他也是用这个培养基先做了液体富集，最后平板涂布筛选。

谢谢！期待您另外的建议！
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12楼2013-12-21 22:43:34
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Leo要努力啊

金虫 (初入文坛)
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15楼: Originally posted by zjcgss at 2013-12-22 08:30:45
这个具体情形就很难描述了，这种菌是否很特别，比如能否利用二氧化碳等？
...

是一种碳源N种菌，都是海洋细菌 应该都是异养的不能利用CO2吧
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17楼2013-12-22 10:47:09
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Leo要努力啊

金虫 (初入文坛)
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16楼: Originally posted by hcjhcj123 at 2013-12-22 09:11:45
通过楼主实验可以知道，你加不加目的碳源两个培养基中细菌的都能明显生长，说明可能培养基有混进C源或者像楼主说的菌体就带有自身提供生长的C源，但前者可能性大，可以检查药剂，琼脂，维生素，空白对照做几组。
  ...

12h都已经长得很high很明显了……再延长时间会有什么不同么？会长得更大吧？
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18楼2013-12-22 10:49:02
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Leo要努力啊

金虫 (初入文坛)
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14楼: Originally posted by dllchina at 2013-12-21 23:41:22
额，那可能是沉淀吧，你确定是菌？很多碳源会沉降的

确定，我是不同菌一起分格点在一个平板上表明的，长起来都各种颜色的菌落了，应该不是碳源沉降。
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19楼2013-12-22 10:50:27
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Leo要努力啊

金虫 (初入文坛)
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13楼: Originally posted by huichong at 2013-12-21 23:19:59
我试过好几种琼脂加水直接接菌来验证琼脂有没有问题，结果表明，我用过的几种均含有碳源，你的可能还有其他影响因素，但是琼脂八成也是有问题的，你可以也试试

额啊 那我用液体养的也长起来是因为其他的试剂也有污染？另外想请教一下有机碳源量是不是很少细菌就能利用其生长起来呢，因为就算真的有污染量也应该很少吧？
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20楼2013-12-22 10:52:29
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