| 查看: 2720 | 回复: 2 | |||
[求助]
考染脱色总是脱过头，什么原因啊？ 已有1人参与
|
|
最近跑完sds-page后做考染总是效果非常不理想。 我的染色液配方是：甲醇500mL，乙酸100mL，水400mL。R-250，2.5g。 脱色液是以上溶液不加R-250。 甲醇乙酸溶液我也是前几天刚配。 我一般是染色液会水浴到70℃，然后染色2-3h。之后过夜脱色。我昨天都没有换液，就加了一次脱色液摇过夜了，早上来看，白花花的，连maker都没有。真是奇怪了。 求各位有经验的大神指点！不甚感激！ ps：我用的丙烯酰胺是碧云天买的30%（29：1），以前用的是生工的30%（37.5:1），不知道这个有没有影响。 [ Last edited by 一苇杭之xmc on 2013-12-19 at 09:49 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征
已经有0人回复
-
BT投稿with editor状态快两周了，正常吗
已经有25人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有296人回复
-
Silevertinib（BDTX-1535）结构拆解：炔基双环片段为何成为合成瓶颈
已经有0人回复
-
RO4929097 解析：双苯并氮杂䓬骨架与 Notch 通路实验设计要点
已经有0人回复
-
分子量 1157 的 PROTAC 怎么配不析出：SGK3-PROTAC1 的溶解、分装与图谱复核
已经有0人回复
-
logP 6.1 的羧酸怎么配母液：GSK 650394 的溶解窗口与稀释顺序
已经有0人回复
-
从"水不溶"到 71 mg/mL：雷特格韦的 pH 依赖溶解与螯合色谱边界
已经有0人回复
-
133 Ų 的极性表面积，如何决定 TNG462 的母液配制与色谱条件
已经有0人回复
-
两个氟原子与一段氨基甲酸甲酯：BLU-5937 的母液配制与稳定性边界
已经有0人回复
-
司美那非（TPN171）：从嘧啶酮母核到工艺放大的结构、色谱与质控参数解析
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 22.0kD-3.3kD小分子marker跑Tricine胶，7.8,5.8和3.3的条带出不来，帮忙分析一下吧
已经有11人回复
- IPTG诱导后，考染后什么蛋白条带都没有
已经有12人回复
- 为什么考马斯亮蓝染色能看到我要的条带，weston却看不到呢？
已经有17人回复
- 【求助/交流】请教聚丙烯酰胺凝胶问题
已经有9人回复
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2013-12-19 12:02:48
一苇杭之xmc: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-12-20 15:22:56
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2013-12-19 12:02:48
一苇杭之xmc: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-12-20 15:22:56
|
甲醇也乙酸的浓度太高了。通常脱色液里的乙酸是7%，甲醇的浓度可以不同。高一些脱色快，低的话脱色慢。超过5%的话最好不要过夜。一般可以用高浓度甲醇脱色液（40-50%）5分钟两次，换成稍低浓度的（25%），一般要脱几个小时。如果需要过夜，换成含甲醇5%的脱色液或者干脆换成水，第二天来了再继续脱色。 丙烯酰胺stock的比例直接影响交联度，对胶的孔径影响很大。通常分蛋白的是37.5:1的。29:1的孔径较小，用于核酸或者大分子蛋白复合物。 |
2楼2013-12-19 10:00:12
3楼2013-12-19 10:55:53
