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考染脱色总是脱过头，什么原因啊？ 已有1人参与
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最近跑完sds-page后做考染总是效果非常不理想。 我的染色液配方是：甲醇500mL，乙酸100mL，水400mL。R-250，2.5g。 脱色液是以上溶液不加R-250。 甲醇乙酸溶液我也是前几天刚配。 我一般是染色液会水浴到70℃，然后染色2-3h。之后过夜脱色。我昨天都没有换液，就加了一次脱色液摇过夜了，早上来看，白花花的，连maker都没有。真是奇怪了。 求各位有经验的大神指点！不甚感激！ ps：我用的丙烯酰胺是碧云天买的30%（29：1），以前用的是生工的30%（37.5:1），不知道这个有没有影响。 [ Last edited by 一苇杭之xmc on 2013-12-19 at 09:49 ] |
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【答案】应助回帖
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2013-12-19 12:02:48
一苇杭之xmc: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-12-20 15:22:56
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甲醇也乙酸的浓度太高了。通常脱色液里的乙酸是7%，甲醇的浓度可以不同。高一些脱色快，低的话脱色慢。超过5%的话最好不要过夜。一般可以用高浓度甲醇脱色液（40-50%）5分钟两次，换成稍低浓度的（25%），一般要脱几个小时。如果需要过夜，换成含甲醇5%的脱色液或者干脆换成水，第二天来了再继续脱色。 丙烯酰胺stock的比例直接影响交联度，对胶的孔径影响很大。通常分蛋白的是37.5:1的。29:1的孔径较小，用于核酸或者大分子蛋白复合物。 |
2楼2013-12-19 10:00:12
3楼2013-12-19 10:55:53
