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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 考染脱色总是脱过头，什么原因啊？
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一苇杭之xmc

银虫 (初入文坛)

[求助] 考染脱色总是脱过头，什么原因啊？ 已有1人参与

最近跑完sds-page后做考染总是效果非常不理想。
我的染色液配方是：甲醇500mL，乙酸100mL，水400mL。R-250，2.5g。
脱色液是以上溶液不加R-250。
甲醇乙酸溶液我也是前几天刚配。
我一般是染色液会水浴到70℃，然后染色2-3h。之后过夜脱色。我昨天都没有换液，就加了一次脱色液摇过夜了，早上来看，白花花的，连maker都没有。真是奇怪了。
求各位有经验的大神指点！不甚感激！
ps：我用的丙烯酰胺是碧云天买的30%（29：1），以前用的是生工的30%（37.5:1），不知道这个有没有影响。

[ Last edited by 一苇杭之xmc on 2013-12-19 at 09:49 ]
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欲速则不达
1楼 2013-12-19 09:36:25
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2013-12-19 12:02:48
一苇杭之xmc: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-12-20 15:22:56
甲醇也乙酸的浓度太高了。通常脱色液里的乙酸是7%，甲醇的浓度可以不同。高一些脱色快，低的话脱色慢。超过5%的话最好不要过夜。一般可以用高浓度甲醇脱色液（40-50%）5分钟两次，换成稍低浓度的（25%），一般要脱几个小时。如果需要过夜，换成含甲醇5%的脱色液或者干脆换成水，第二天来了再继续脱色。
丙烯酰胺stock的比例直接影响交联度，对胶的孔径影响很大。通常分蛋白的是37.5:1的。29:1的孔径较小，用于核酸或者大分子蛋白复合物。
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2楼2013-12-19 10:00:12
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一苇杭之xmc

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-19 10:00:12
甲醇也乙酸的浓度太高了。通常脱色液里的乙酸是7%，甲醇的浓度可以不同。高一些脱色快，低的话脱色慢。超过5%的话最好不要过夜。一般可以用高浓度甲醇脱色液（40-50%）5分钟两次，换成稍低浓度的（25%），一般要脱几 ...

好的好的，非常有用的信息！
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欲速则不达
3楼2013-12-19 10:55:53
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