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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 设计引物Tm值过高？？？
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sckcf

铜虫 (小有名气)

[求助] 设计引物Tm值过高？？？

我设计的上引物Tm值53℃，下引物58℃，GC含量都是50%，为什么Pruduct的Tm值是91℃？？？Pruduct的Tm是指的什么哦？？？我用的Primer Premier 5设计的。。。。退火温度是根据什么设计啊？？？跪求分子高手解答。。。我是新手。。。。:hand
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1楼 2013-12-03 21:26:19
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lm2570

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-04 02:03:57
sckcf: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-12-04 20:31:34
实际的Tm不会有91那么高，既然都合成了引物，且上下游的Tm都才53，58度，退火温度你可先试50--53度
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2楼2013-12-03 22:00:20
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yuxiangdan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-04 02:04:15
sckcf: 金币+1 2013-12-04 20:31:48
91是指你扩增的产物的退火温度，一般没什么用，PCR就看引物的就行

[ 发自小木虫客户端 ]
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成功者永不放弃，放弃者永不成功。
3楼2013-12-04 00:07:49
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三蛰

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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这个产物退火温度，说实话没用。。。。
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我不会！
4楼2013-12-04 08:43:53
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任_强

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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sckcf: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-12-04 20:31:59
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-05 00:54:36
这个网上有很详细的解释，根据引物的Tm值上下加减一定温度，定为退火温度。效果不好的话再换。产物Tm值无用
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微生物行业的初学者，望大牛们不吝赐教
5楼2013-12-04 09:54:02
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yilunanxia

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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sckcf: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-12-04 20:32:04
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-05 00:54:43
一个是你的引物的，就是53和58度；另外一个是你扩增后的产物，你扩增后的product的片段要比引物大多了。弱弱的问一下，楼主的产物的Tm值是91，溶解曲线的峰值单一么？
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6楼2013-12-04 10:26:38
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mada1986

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-12-05 00:54:52
产物退火温度和引物退火温度之间的差异越大越好啊
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7楼2013-12-04 12:04:54
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sckcf

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by yilunanxia at 2013-12-04 10:26:38
一个是你的引物的，就是53和58度；另外一个是你扩增后的产物，你扩增后的product的片段要比引物大多了。弱弱的问一下，楼主的产物的Tm值是91，溶解曲线的峰值单一么？

什么溶解曲线啊？？？荧光PCR？
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8楼2013-12-04 20:27:53
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