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sckcf

铜虫 (小有名气)

[求助] 设计引物Tm值过高???

我设计的上引物Tm值53℃,下引物58℃,GC含量都是50%,为什么Pruduct的Tm值是91℃???Pruduct的Tm是指的什么哦???我用的Primer Premier 5设计的。。。。退火温度是根据什么设计啊???跪求分子高手解答。。。我是新手。。。。:hand
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lm2570

木虫 (正式写手)

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gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-04 02:03:57
sckcf: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-12-04 20:31:34
实际的Tm不会有91那么高,既然都合成了引物,且上下游的Tm都才53,58度,退火温度你可先试50--53度
2楼2013-12-03 22:00:20
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yuxiangdan

木虫 (正式写手)

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sckcf: 金币+1 2013-12-04 20:31:48
91是指你扩增的产物的退火温度,一般没什么用,PCR就看引物的就行

[ 发自小木虫客户端 ]
成功者永不放弃,放弃者永不成功。
3楼2013-12-04 00:07:49
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三蛰

铜虫 (小有名气)

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这个产物退火温度,说实话没用。。。。
我不会!
4楼2013-12-04 08:43:53
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任_强

金虫 (小有名气)

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sckcf: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-12-04 20:31:59
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-05 00:54:36
这个网上有很详细的解释,根据引物的Tm值上下加减一定温度,定为退火温度。效果不好的话再换。产物Tm值无用
微生物行业的初学者,望大牛们不吝赐教
5楼2013-12-04 09:54:02
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yilunanxia

金虫 (正式写手)

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sckcf: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-12-04 20:32:04
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-05 00:54:43
一个是你的引物的,就是53和58度;另外一个是你扩增后的产物,你扩增后的product的片段要比引物大多了。弱弱的问一下,楼主的产物的Tm值是91,溶解曲线的峰值单一么?
6楼2013-12-04 10:26:38
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mada1986

木虫 (小有名气)

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gyesang: 金币+1, 鼓励交流! 2013-12-05 00:54:52
产物退火温度和引物退火温度之间的差异越大越好啊
7楼2013-12-04 12:04:54
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sckcf

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by yilunanxia at 2013-12-04 10:26:38
一个是你的引物的,就是53和58度;另外一个是你扩增后的产物,你扩增后的product的片段要比引物大多了。弱弱的问一下,楼主的产物的Tm值是91,溶解曲线的峰值单一么?

什么溶解曲线啊???荧光PCR?
8楼2013-12-04 20:27:53
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