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tianshangxin

新虫 (小有名气)

[求助] 怎样才能实现方法的重复性?

我目前在寻找一种方法实现对中药成分的质量控制,可怎么做就是实现不了方法的重复性。我先用乙腈——0.05%磷酸体系作流动相,主峰和前面的杂质峰离得太近,杂质峰没下来到基线上主峰就已经起来了;改用甲醇-0.05%磷酸体系作流动相,当保留时间靠前时,峰形有些漂移,当把保留时间往后推之后,峰形变得太宽。后来按领导的提示把样品过大孔树脂柱进行纯化一下,纯化之后杂质峰变得小些了但仍存在,还是难以保证重复性。实验室现有的C-18柱子全是安捷伦的,我都试过了保留时间都比较靠前,领导考虑到成本昂贵不会给买特殊的柱子,我已经调整峰形调整了一个多月了还是没有什么成效,心里非常着急,请问什么样的峰形是好峰形?基线漂移的峰形算是好峰形吗?怎样才能实现方法的重复性?
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tianshangxin

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 星海慧儿 at 2013-11-22 14:19:53
降低有机相比例试试,可以增大保留时间,另外峰对称因子在1左右说明峰型良好,你看看药典后面的高效液相色谱法部分。

好的,我试试,谢谢。
6楼2013-11-23 12:18:14
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gwmgyp

版主 (知名作家)

搬砖将

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
tianshangxin: 金币+7, ★★★很有帮助 2013-11-21 13:54:52
不知道你的检测波长是多少,如果是末端吸收就会使基线漂移,最好用乙腈作为有机相并控制柱温;如果得不到改善,那么请更换一下色谱柱品牌试试,比如用waters的symmetry的色谱柱试一下,末端吸收的流动相千万不要用乙酸铵缓冲盐配流动相啊!
gwmgyp
2楼2013-11-21 10:16:24
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raulsam1984

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
tianshangxin(zhychen2008代发): 金币+2, 多谢回帖交流 2013-11-21 17:21:21
tianshangxin: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-11-21 20:38:52
楼主试走一下梯度吧,按情况看,楼主既然用乙腈-盐都没有分开的话,用甲醇-盐就更不可能了。而且你用打孔树脂也只是把杂质的量变小了,没有达到去除的目的。所以关键还是流动相的比例问题,还有就是你物质的电离平衡常数,这跟你选择的缓冲盐有关系,这个也要注意注意。
3楼2013-11-21 14:32:03
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匿名

用户注销 (正式写手)

本帖仅楼主可见
4楼2013-11-21 19:57:44
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