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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何选择原核表达所要用到的限制性内切酶
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我要吃西瓜

金虫 (初入文坛)

[求助] 如何选择原核表达所要用到的限制性内切酶 已有1人参与

如题，本人新手，最近要做原核表达，请问有没有什么软件可以用来分析所需要用的限制性内切酶，直接给出推荐结果的那种，用DNAman得出来的还要一个个去看太麻烦了。。
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1楼 2013-11-09 10:31:14
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玉婷881213

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kehan777 at 2013-11-09 10:59:08
VectorNTI 软件，可直接得出限制性内切酶的分析报告，看到Non-cutters中片段没有的酶切位点，和你的载体中有的酶切位点有那些是相同的，最好是你实验室里面现成有的，就是它了，记得加上保护性碱基..

1.jpg
...

请问1.non-cutters是什么意思，是这段基因中没有的内切酶还是有这么多种内切酶？
2.选择内切酶的时候，在基因片段中没有的内切酶中和载体中有的内切酶中，选择一个常用的，对吗？也就是说这一个即能切开载体，也能切开基因片段，对吗？
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3楼2014-09-25 22:06:17
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kehan777

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-09-27 17:51:50
引用回帖:
3楼: Originally posted by 玉婷881213 at 2014-09-25 22:06:17
请问1.non-cutters是什么意思，是这段基因中没有的内切酶还是有这么多种内切酶？
2.选择内切酶的时候，在基因片段中没有的内切酶中和载体中有的内切酶中，选择一个常用的，对吗？也就是说这一个即能切开载体，也能 ...

non-cutters就是你分析的片段中没有的酶切位点。
基因片段没有的内切酶中和载体中有的内切酶中，选择一个常用的，对！
即能切开载体，也能切开基因片段？
这是基因片段末端补上了（本身没有）和载体上相同的酶切位点后，才有的；怎么补？可以通过全基因合成，或者合成引物后PCR。
之后通过酶切切基因片段和载体，它们就有了相同的末端，就可以通过连接酶连接起来，形成一个环状的质粒。然后转化到菌里面克隆，表达。
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4楼2014-09-26 08:57:29
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