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costume2

新虫 (初入文坛)

[求助] 【求助/交流】+ 如何扩增GC含量高的外显子

我需要扩增1个基因的1号外显子,但是这段外显子的GC含量有70%,我设计了几对引物,采用常规PCR,均没有P出来,应该怎么办呢?
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yb19841014

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-09 01:35:35
建议加入DMSO  甘油 甜菜碱  具体浓度可以查找文献
2楼2013-11-08 21:49:27
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plantvirus

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
换高GC buffer,大连宝生物就有。如果不差钱,就用thermo 的phusion。
Imaginationismoreimportantthanknowledge!
3楼2013-11-09 02:20:50
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plantvirus

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

Phusion High-Fidelity DNA Polymerases 这个酶,里面带着GC buffer
Imaginationismoreimportantthanknowledge!
4楼2013-11-09 02:22:49
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bingdong05

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
利用高GC buffer,另外PCR体系里面添加1ul的DMSO(20ul)体系
5楼2013-11-09 16:12:11
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
Takara的 Primer STAR  + 2X HS GC BUFFER 应该能扩出来!
jiayoubashaonian
6楼2013-11-11 16:16:22
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