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冰河77960000

新虫 (初入文坛)

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[求助] 求助mtt实验结果无法重复的原因

本人在做多肽类药物抗肿瘤方面的研究，通过分子生物学方法获取多肽序列，然后化学合成多肽序列（吉尔生化合成），第一次合成的样品用mtt方法检测对多种癌细胞都有抑制生长的作用

，这批多肽用了后，又合成了一些，第二次合成后mtt检测的效果就跟第一次不一样，抑制效果同比下降了许多

，在一批合成检测时对MCF-7抑制效果最明显，第二批的药对此细胞的作用就不明显了，现在又合成了第三次，对mcf-7几乎完全没有作用

，现在及其苦恼，可能的原因是什么，求助！
（实验前后持续了好到一年，mcf-7的细胞不是来源于同一批冻存细胞，mtt实验操作过程是，第一天铺96孔板，24h后加药，药用培养基梯度稀释，在等48h加mtt，4h后用DMSO溶解，510/630nm处检测吸光值，对照组吸光值控制在1.5以内）

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1楼 2013-11-04 14:59:06

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houjinglhy

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

楼主在做多肽类的抗肿瘤药物？
据我所知，目前的多肽类抗肿瘤药物只有促性腺激素释放激素类（抑制性激素）和胸腺肽类（免疫刺激）的抗肿瘤药物，但是这类药物能通过抑制细胞增殖的方法来鉴定么？很好奇。当然不排除创新性的药物。
我觉得首先得从实验设计开始，确保实验方法没问题。
对于方法：1、细胞株的稳定性很重要。最好用同一批冻存的细胞，且适应性培养一段时间的细胞。
            2、最好用24孔板最MTT，避免操作时吸出结晶。
            3、OD490可能相对敏感度更好点。
            4、MTT本身的稳定性不好，尽量多做复孔，多重复。判断标准用IC50

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从小就学习鲁迅，直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助，却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊！

2楼2013-11-04 17:17:37

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冰河77960000

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引用回帖:

2楼: Originally posted by houjinglhy at 2013-11-04 17:17:37
楼主在做多肽类的抗肿瘤药物？
据我所知，目前的多肽类抗肿瘤药物只有促性腺激素释放激素类（抑制性激素）和胸腺肽类（免疫刺激）的抗肿瘤药物，但是这类药物能通过抑制细胞增殖的方法来鉴定么？很好奇。当然不排除 ...

先谢谢您的回复，因为我是第一次发帖子，收到回复还蛮激动的呢，其实我本来是研究抗菌肽的，因为有报道说部分抗菌肽有抗肿瘤的作用，所以我实验也想往这方面尝试一下，当然还没有做太深，也没有涉及到机制，就是先看看对细胞增殖的影响。对于您给的建议，我会在实验中尝试。我现在怀疑的地方主要在多肽上，因为我觉得mtt虽然稳定性不好，但是在反应药物能力的趋势上不应该有太大差异，想请问您，我的多肽合成回来，称重稀释后（通常是1mg/ml的浓度配置2ml），要过膜除菌，过膜会不会明显改变多肽浓度，还有公司在合成多肽时，每次合成的结果会不会有明显差异？