24小时热门版块排行榜    

查看: 4223  |  回复: 49

山水88

木虫 (正式写手)

引用回帖:
30楼: Originally posted by Haibara_Ai at 2013-11-19 11:40:07
wtLAC promoter得话全程用LB培养基,Plac是Crp激活,LacI抑制,Crp是受cAMP(葡萄糖抑制)调控
另外用Plac是没什么道理的,这个promoter不是个很好地promoter(乱起八糟调控太多,strength和leaky都不明,我觉得相 ...

恩,那我可以尝试下pKD46了,看看效果如何
31楼2013-11-19 15:36:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

爱久见人心93

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
13楼: Originally posted by oaixlittle at 2013-11-02 15:25:13
以前我们做这个转化效率不高,就是增加感受态和PCR片段的量,50ml菌体做一管感受态,PCR产物50或100ul沉淀到5ul直接全部转掉
假阳性多可能是你PCR的模板没弄好,一定不能有质粒混在里面。我们用的是pIJ773,一定要 ...

PCR产物怎样沉淀呢?是用醋酸钠、无水乙醇等浓缩吗?那在浓缩之前是不是要对PCR产物先电泳检测一下呢
32楼2014-02-22 19:11:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

山水88

木虫 (正式写手)

引用回帖:
32楼: Originally posted by 爱久见人心93 at 2014-02-22 19:11:32
PCR产物怎样沉淀呢?是用醋酸钠、无水乙醇等浓缩吗?那在浓缩之前是不是要对PCR产物先电泳检测一下呢...

有核酸共沉剂试剂盒,PCR完了之后胶回收再核酸共沉
33楼2014-02-24 10:13:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

苏菲阿酱

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
13楼: Originally posted by oaixlittle at 2013-11-02 15:25:13
以前我们做这个转化效率不高,就是增加感受态和PCR片段的量,50ml菌体做一管感受态,PCR产物50或100ul沉淀到5ul直接全部转掉
假阳性多可能是你PCR的模板没弄好,一定不能有质粒混在里面。我们用的是pIJ773,一定要 ...

你好呀~我们也在做,也是想想你这样增大感受态的用量,但是好像很浓很浓,最后复苏的时候拿起来管底都有沉淀,我想问一下你们最后涂板是离心了之后全部涂板还是只取一部分液体涂板啊,另外能涨多少个阳性克隆啊转化效率有多高?谢谢啦感激不尽!
34楼2014-10-02 17:02:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

山水88

木虫 (正式写手)

引用回帖:
34楼: Originally posted by 苏菲阿酱 at 2014-10-02 17:02:23
你好呀~我们也在做,也是想想你这样增大感受态的用量,但是好像很浓很浓,最后复苏的时候拿起来管底都有沉淀,我想问一下你们最后涂板是离心了之后全部涂板还是只取一部分液体涂板啊,另外能涨多少个阳性克隆啊转化 ...

全部涂板,效率不是很高
35楼2014-10-05 08:49:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

苏菲阿酱

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
35楼: Originally posted by 山水88 at 2014-10-05 08:49:31
全部涂板,效率不是很高...

哦哦好的谢谢~那大概可以长多少个阳性克隆呢
36楼2014-10-06 20:00:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

山水88

木虫 (正式写手)

引用回帖:
36楼: Originally posted by 苏菲阿酱 at 2014-10-06 20:00:30
哦哦好的谢谢~那大概可以长多少个阳性克隆呢...

这个我没计算,当时是挑的挺多的
37楼2014-10-07 09:00:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

oaixlittle

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
34楼: Originally posted by 苏菲阿酱 at 2014-10-02 17:02:23
你好呀~我们也在做,也是想想你这样增大感受态的用量,但是好像很浓很浓,最后复苏的时候拿起来管底都有沉淀,我想问一下你们最后涂板是离心了之后全部涂板还是只取一部分液体涂板啊,另外能涨多少个阳性克隆啊转化 ...

全部涂板,效率不高,多的时候二三十个,少的时候几个,而且容易长小的假阳性菌落,转接的时候挑长得大的
38楼2014-10-10 17:46:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

llp1030

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 山水88 at 2013-11-02 00:05:54
1、将PKD46化转到大肠杆菌中,挑取单克隆,提取质粒,初步验证后,接种至AMP培养基中30度过夜培养,次日1:50转接至新鲜培养基,培养至OD600=0.2时加入阿拉伯糖至终浓度0.2%,继续培养到OD0.6时,制备电转感受态细胞 ...

您好!我想问问您敲掉了吗?我最近也是一直在做,可是一直敲不掉,想问问方法上有什么注意的?
39楼2014-12-29 13:16:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

山水88

木虫 (正式写手)

引用回帖:
39楼: Originally posted by llp1030 at 2014-12-29 13:16:41
您好!我想问问您敲掉了吗?我最近也是一直在做,可是一直敲不掉,想问问方法上有什么注意的?...

我也不知道你出现了什么问题,反正按照操作来都会做出来的,如果不成功想办法找下原因解决了就行了
40楼2014-12-30 10:04:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 山水88 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 211本,11408一志愿中科院277分,曾在中科院自动化所实习 +3 Losir 2026-03-12 4/200 2026-03-16 21:52 by Losir
[考研] 材料专硕326求调剂 +5 墨煜姒莘 2026-03-15 5/250 2026-03-16 21:30 by 木瓜膏
[考研] 304求调剂 +5 素年祭语 2026-03-15 5/250 2026-03-16 17:00 by 我的船我的海
[考研] 一志愿苏州大学材料工程(085601)专硕有科研经历三项国奖两个实用型专利一项省级立项 +3 大火山小火山 2026-03-16 5/250 2026-03-16 16:54 by barlinike
[考研] 304求调剂 +4 ahbd 2026-03-14 4/200 2026-03-16 16:48 by 我的船我的海
[考研] 0703化学调剂 +6 妮妮ninicgb 2026-03-15 9/450 2026-03-16 16:40 by houyaoxu
[考研] 中科院材料273求调剂 +4 yzydy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 15:59 by Gaodh_82
[考研] 326求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-15 3/150 2026-03-16 07:33 by Iveryant
[基金申请] NSFC申报书里申请人简历中代表性论著还需要在申报书最后的附件里面再上传一遍吗 20+5 NSFC2026我来了 2026-03-10 14/700 2026-03-15 23:53 by 不负韶华的虎
[考研] 294求调剂 +3 Zys010410@ 2026-03-13 4/200 2026-03-15 10:59 by zhq0425
[考研] 材料与化工(0856)304求B区调剂 +7 邱gl 2026-03-10 11/550 2026-03-14 12:18 by 邱gl
[考研] 一志愿华中农业大学071010,总分三百二,求调剂 +3 困困困困坤坤 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:35 by JourneyLucky
[考研] b区环境工程求调剂 +4 Maps1 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:23 by JourneyLucky
[考研] 2026考研调剂+本科延边大学+山东大学+生物化学与分子生物学+有项目经验 +3 ccdsscjy 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:12 by JourneyLucky
[考研] 复试调剂 +9 Copy267 2026-03-10 9/450 2026-03-13 23:45 by userper
[考研] 285 求调剂 资源与环境 一志愿北京化工大学 +3 未名考生 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:04 by JourneyLucky
[考研] 求材料调剂 +5 隔壁陈先生 2026-03-12 5/250 2026-03-13 22:03 by 星空星月
[考研] 304求调剂 +7 7712b 2026-03-13 7/350 2026-03-13 21:42 by peike
[考研] 268求调剂 +4 好运连绵不绝 2026-03-12 4/200 2026-03-13 10:45 by hyswxzs
[考研] 420求调剂 +4 莫向外求11 2026-03-10 6/300 2026-03-12 14:41 by ruiyingmiao
信息提示
请填处理意见