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山水88木虫 (正式写手)
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[求助]
Red重组老是不成功，求救
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| 用Red重组敲除基因，做了一个多月了，还是没有成功，前期是抗性基因片段PCR量低，后来换了酶解决了，转了pKD46之后的菌株诱导表达到OD0.6制备感受态转化PCR片段，过程应该都是比较常规的了，可是这么久就是不成功，请问有做过的指点一下，谢谢了，浪费不起时间了 |
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wtLAC promoter得话全程用LB培养基，Plac是Crp激活，LacI抑制，Crp是受cAMP（葡萄糖抑制）调控 另外用Plac是没什么道理的，这个promoter不是个很好地promoter（乱起八糟调控太多，strength和leaky都不明，我觉得相比pkd46用得pbad优势不大，其实真要有空这个优化起来也不难）。 做KO个人用过现成的里面pSIM19的效率最好（用得wtPL） http://www.nature.com/nprot/jour ... nprot.2008.227.html |
30楼2013-11-19 11:40:07
guohuayin
木虫 (著名写手)
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-11-04 08:36:13
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http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=6366582 我做过Red重组敲除大肠杆菌基因，上面是我发的帖子，混总了一下相关问题，你可以参考一下，如果有问题，欢迎交流。 |
2楼2013-11-01 20:29:45
山水88
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3楼2013-11-01 21:09:04
山水88
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4楼2013-11-01 21:17:33
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