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quxd

金虫 (正式写手)

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[交流] Ecoli BL21 DE3表达蛋白时突然变澄清，但非噬菌体污染，究竟是怎么回事？已有11人参与

最近利用Ecoli BL21 DE3/pET28a生产蛋白，小摇瓶培养很正常,IPTG诱导后蛋白活性也很好；但在7L发酵罐中，起初培养还算正常，加入IPTG之后不久菌就越摇越稀，感觉像裂解了。检查噬菌斑也没有发现噬菌体污染，也尝试了各种培养基，也不行。不知各位有没有碰到过类似情况，该如何解决？

[ Last edited by quxd on 2013-10-31 at 12:16 ]

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1楼2013-10-31 12:15:04

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eastrocket

木虫 (初入文坛)

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如该现象已经多次实验确证，应该是表达蛋白具有细胞毒性所致，该种诱因最明显的特点就是诱导后细胞逐渐死亡（死亡速度低于噬菌体感染），但仍然会存余活菌（质粒丢失所致）。如想避免，可降低温度，降低IPTG使用量，延长诱导时间试试；如果效果不明显，可换有细胞毒性耐受的宿主菌或对目标蛋白进行融合表达。

[ 发自小木虫客户端 ]

[ Last edited by eastrocket on 2013-11-1 at 06:05 ]