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quxd

金虫 (正式写手)

[交流] Ecoli BL21 DE3表达蛋白时突然变澄清,但非噬菌体污染,究竟是怎么回事?已有11人参与

最近利用Ecoli BL21 DE3/pET28a生产蛋白,小摇瓶培养很正常,IPTG诱导后蛋白活性也很好;但在7L发酵罐中,起初培养还算正常,加入IPTG之后不久菌就越摇越稀,感觉像裂解了。检查噬菌斑也没有发现噬菌体污染,也尝试了各种培养基,也不行。不知各位有没有碰到过类似情况,该如何解决?

[ Last edited by quxd on 2013-10-31 at 12:16 ]
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jiangtailong

新虫 (初入文坛)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-10-31 22:24:07
诱导时od不能太低,一般在对数期中后期,注意补料跟进,菌体自溶可能是缺乏氮源,摇瓶多转接几次看是否有自溶,菌种复壮后再试试

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2013-10-31 13:35:32
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lpzl

木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-10-31 13:27:44
IPTG对细胞有毒性,会抑制菌生长,浓度时多少?还有啥时候加的??一般在菌对数期加比较好。。。
Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...
2楼2013-10-31 12:22:41
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quxd

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lpzl at 2013-10-31 12:22:41
IPTG对细胞有毒性,会抑制菌生长,浓度时多少?还有啥时候加的??一般在菌对数期加比较好。。。

IPTG用的是0.1mM,OD在15-20的时候加的。是不是太老了?
4楼2013-10-31 22:58:29
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quxd

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by jiangtailong at 2013-10-31 13:35:32
诱导时od不能太低,一般在对数期中后期,注意补料跟进,菌体自溶可能是缺乏氮源,摇瓶多转接几次看是否有自溶,菌种复壮后再试试

IPTG的浓度是0.1mM,一般在OD15-20的时候加的,是不是有点过老了?N源这块到时没有太注意,流加的时候也补加了一点,是不是需要摸索下?
5楼2013-10-31 23:00:17
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