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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » HPLC总出现倒峰怎么回事
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angel901216

金虫 (小有名气)

[求助] HPLC总出现倒峰怎么回事

用HPLC分析样品时，330nm出现正常的谱图，530出现的却是倒峰，这是怎么回事呢？
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1楼 2013-10-28 16:07:55
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angel901216

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wjg6670 at 2013-10-28 16:15:14
很正常的现象，说明在530nm处样本的吸光度小于流动相的吸光度。有时人为向流动相中添加某波长吸收剂，然后测定该波长处无吸收的物质。所谓倒峰测定。

可是文献上就在530出现的正峰，为了准确，我照文献的方法做了一遍，还是这样
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3楼2013-10-28 16:27:04
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wjg6670

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
angel901216: 金币+5, ★有帮助 2013-10-29 09:42:39
很正常的现象，说明在530nm处样本的吸光度小于流动相的吸光度。有时人为向流动相中添加某波长吸收剂，然后测定该波长处无吸收的物质。所谓倒峰测定。
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2楼2013-10-28 16:15:14
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wjg6670

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by angel901216 at 2013-10-28 16:27:04
可是文献上就在530出现的正峰，为了准确，我照文献的方法做了一遍，还是这样...

暂且不说别的，文献只是参考，你永远无法具有和文献相同的条件。这个你懂得。
既然在530nm处是倒峰说明样本的吸光度小于流动相，那检查流动相，流动相是否有可以产生吸光度的物质，也就是增加背景值的物质，还有你用的流动相溶剂的纯度是否合格，不要只看标签纯度，卖假货的从来不贴假货商标。
那反过来，你的流动相溶剂和文献相同吗，你的色谱柱和文献一致吗，这个你就理解为什么色谱柱出厂每根都要单独出具检测报告，同一厂家生产同批次还有差异。
液相色谱只关心这几个参数，用何种类型色谱柱，流动相配比，检测波长，具体操作参数以实际待测物质检测为准，可能流动相会与文献有差异，但只要分离就好，不能照搬，仪器分析贵在灵活应用。
再者为何不扫描待测物质，通过紫外图谱确定检测波长呢。紫外波长跟溶剂极性、PH等因素相关。
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4楼2013-10-29 08:06:56
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玻璃珠

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
流动相是不是色谱纯的，有没有过膜和超声呢？
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5楼2013-10-29 09:00:12
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