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angel901216

金虫 (小有名气)

[求助] HPLC总出现倒峰怎么回事

用HPLC分析样品时,330nm出现正常的谱图,530出现的却是倒峰,这是怎么回事呢?
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wjg6670

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
angel901216: 金币+5, 有帮助 2013-10-29 09:42:39
很正常的现象,说明在530nm处样本的吸光度小于流动相的吸光度。有时人为向流动相中添加某波长吸收剂,然后测定该波长处无吸收的物质。所谓倒峰测定。
2楼2013-10-28 16:15:14
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wjg6670

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by angel901216 at 2013-10-28 16:27:04
可是文献上就在530出现的正峰,为了准确,我照文献的方法做了一遍,还是这样...

暂且不说别的,文献只是参考,你永远无法具有和文献相同的条件。这个你懂得。
既然在530nm处是倒峰说明样本的吸光度小于流动相,那检查流动相,流动相是否有可以产生吸光度的物质,也就是增加背景值的物质,还有你用的流动相溶剂的纯度是否合格,不要只看标签纯度,卖假货的从来不贴假货商标。
那反过来,你的流动相溶剂和文献相同吗,你的色谱柱和文献一致吗,这个你就理解为什么色谱柱出厂每根都要单独出具检测报告,同一厂家生产同批次还有差异。
液相色谱只关心这几个参数,用何种类型色谱柱,流动相配比,检测波长,具体操作参数以实际待测物质检测为准,可能流动相会与文献有差异,但只要分离就好,不能照搬,仪器分析贵在灵活应用。
再者为何不扫描待测物质,通过紫外图谱确定检测波长呢。紫外波长跟溶剂极性、PH等因素相关。
4楼2013-10-29 08:06:56
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普通回帖

angel901216

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wjg6670 at 2013-10-28 16:15:14
很正常的现象,说明在530nm处样本的吸光度小于流动相的吸光度。有时人为向流动相中添加某波长吸收剂,然后测定该波长处无吸收的物质。所谓倒峰测定。

可是文献上就在530出现的正峰,为了准确,我照文献的方法做了一遍,还是这样
3楼2013-10-28 16:27:04
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玻璃珠

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
流动相是不是色谱纯的,有没有过膜和超声呢?
5楼2013-10-29 09:00:12
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angel901216

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 玻璃珠 at 2013-10-29 09:00:12
流动相是不是色谱纯的,有没有过膜和超声呢?

必须的呀
6楼2013-10-29 09:41:14
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匿名

用户注销 (著名写手)

本帖仅楼主可见
7楼2013-10-29 11:49:38
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rice0012009

金虫 (小有名气)

我以前也遇到过,流动相杂质引起的,你重新配置流动相试试看

[ 发自小木虫客户端 ]
8楼2013-10-29 12:54:21
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玻璃珠

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by angel901216 at 2013-10-29 09:41:14
必须的呀...

那就换换流动相试试
9楼2013-10-29 18:49:46
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金城小学生

木虫 (著名写手)

小木虫

引用回帖:
4楼: Originally posted by wjg6670 at 2013-10-29 08:06:56
暂且不说别的,文献只是参考,你永远无法具有和文献相同的条件。这个你懂得。
既然在530nm处是倒峰说明样本的吸光度小于流动相,那检查流动相,流动相是否有可以产生吸光度的物质,也就是增加背景值的物质,还有你 ...

赞同,回答准确无误!

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
勇者不惧、知者不惑、仁者不忧。
10楼2013-10-30 00:08:06
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