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475502411

铜虫 (著名写手)

[求助] PGEX-4T-1载体表达产物,GST标签的切除

最近做一个蛋白连接到GEX-4T-1上进行表达,但发现该蛋白检测人血清中的抗体的时候,有很高的假阳出现。现在考虑可能是GST标签的原因,因此想切除此标签。我们论坛上的虫友不知道有没有做过相关的,麻烦指导一下
1. 选用凝血酶进行切除, 看有人用人凝血酶(sigmaT6884 ),不知道效率如何
2.用GST纯化以后再切,切了以后再过柱子,流穿出来的就是我的样品,但凝血酶怎么除掉
3. 这样的话成本会不会很高

另外,有没有虫友有说明书,可不可以分享一下

不胜感激
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可以朝九晚五,也能浪迹天涯
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0624410024

金虫 (正式写手)

Begging for knowledge

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
475502411: 金币+5 2013-10-17 13:32:29
475502411: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-10-17 13:32:57
475502411: 金币+5 2013-10-17 13:33:11
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-10-20 18:22:12
引用回帖:
7楼: Originally posted by 475502411 at 2013-10-17 09:25:35
但是这个蛋白要用到体外诊断试剂上,检测人血液中的抗体,现在有家养存在,を怀疑是标签跟部分血液中的物质反应,所以想把标签却下来。有没有合适的酶推荐呢?谢谢...

你现在也只是怀疑是因为你的标签影响你的实验结果,你可以做对照看下,你可以用其他的带GST的融合蛋白做为阴性对照看看,如果为阳性那就说明是你的标签影响,如果阴性对照成立就说明不是标签的影响撒,不要动不动就切标签。
每天坚持多一点,以后困难少一点!
9楼2013-10-17 12:49:06
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查看全部 16 个回答

475502411

铜虫 (著名写手)

怎么没人回复呢?大家有人知道带标签的凝血酶哪个公司有卖吗?谢谢
可以朝九晚五,也能浪迹天涯
2楼2013-10-16 15:40:21
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梦想很重要

禁虫 (初入文坛)

感谢参与,应助指数 +1
本帖内容被屏蔽

3楼2013-10-16 22:42:31
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲,勿施于人

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-10-17 10:40:30
1. 需要用带GST标签的酶
2. 成本的确很高, 主要是GST的树脂和酶
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
4楼2013-10-17 01:08:12
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