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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PGEX-4T-1载体表达产物，GST标签的切除
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475502411

铜虫 (著名写手)

[求助] PGEX-4T-1载体表达产物，GST标签的切除

最近做一个蛋白连接到GEX-4T-1上进行表达，但发现该蛋白检测人血清中的抗体的时候，有很高的假阳出现。现在考虑可能是GST标签的原因，因此想切除此标签。我们论坛上的虫友不知道有没有做过相关的，麻烦指导一下
1. 选用凝血酶进行切除， 看有人用人凝血酶（sigmaT6884 ），不知道效率如何
2.用GST纯化以后再切，切了以后再过柱子，流穿出来的就是我的样品，但凝血酶怎么除掉
3. 这样的话成本会不会很高

另外，有没有虫友有说明书，可不可以分享一下

不胜感激
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可以朝九晚五，也能浪迹天涯
1楼 2013-10-15 16:10:29
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-17 10:40:30
1. 需要用带GST标签的酶
2. 成本的确很高, 主要是GST的树脂和酶
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
4楼2013-10-17 01:08:12
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查看全部 16 个回答

475502411

铜虫 (著名写手)
怎么没人回复呢？大家有人知道带标签的凝血酶哪个公司有卖吗？谢谢
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可以朝九晚五，也能浪迹天涯
2楼2013-10-16 15:40:21
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梦想很重要

禁虫 (初入文坛)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
3楼2013-10-16 22:42:31
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-17 10:40:36
楼主不如把GST换成HIS标记,
首先你不确定这个假阳是GST引起的(万一是蛋白本身折叠的问题造成的呢?), 其次thrombin不一定好使(需要融合蛋白的结合部充分暴露在外面), 再有, 你也提到了, 切完后thrombin怎么去除掉也可能是个头痛的问题.
所以我建议楼主干脆换标签吧, 祝好运!
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5楼2013-10-17 04:17:30
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