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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 生工测序重叠峰交流
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沙门小rna

金虫 (正式写手)

[交流] 生工测序重叠峰交流

我在做表达载体（表达一段小rna全长138bp），构建后的载体热击入top10，单菌落挑出来（但是菌落太密集，可能会不小心把两个菌落增到一个区域。）。
经过筛菌，提质粒双酶切和pcr验证条带成功。然后送测序，结果生工返回的结果：

原文：“7号，19号 （使用引物  PBV220R） 测序后发现有重叠现象”，然后给了我用PBAD-F_J引物测序的结果。上blast之后结果是一个载体序列。


百思不得其解。

1：如果是重叠峰。怎么还给了一个结果。
2：如果我酶切验证的条带都出来了。怎么测序还会是空的呢。

目前自我分析结果：1可能长出来的单菌落比较密集。筛菌时候混杂了带有空载体的菌。2但是这样的话。为什么还给了结果呢？3生工靠谱吗？怎么解决呢。是不是我吧增的菌再画个4区然后再增下验证再测序呢？

求有测序经验的朋友帮忙分析解释下吧!谢谢
生工测序重叠峰交流
测序7号19号.png

[ Last edited by 沙门小rna on 2013-10-14 at 17:35 ]
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    • 2013-10-14 17:23:37, 343.15 K

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1楼2013-10-14 17:33:00
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沙门小rna

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 沙门小rna at 2013-10-15 10:28:08

终于有一个回复的，怎么连人都没有啊。我可是诚心交流讨教的。家里25块金币给了10个
赞一下 回复此楼
4楼2013-10-15 10:29:25
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沙门小rna

金虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 冰风颤木 at 2013-11-28 15:13:00
你好 你的峰图我刚刚看了下 第一个峰图ZB10122846(7hao)PBAD-F_J_A12还是很好的 第二个峰图200多bp后开始出现重叠峰
个人建议：
1、按照ZB10122846(7hao)PBAD-F_J_A12这个测序方向继续测通；
2、换个公司测测吧 ...

鍡紝璋㈣阿

[ 发自小木虫客户端 ]
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9楼2013-11-28 15:24:08
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沙门小rna3楼
2013-10-15 10:28   回复  
引用回帖:
2楼: Originally posted by yingying1588 at 2013-10-14 22:14:00

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