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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 酵母转化之后表现出抗性，但pcr无法验证出来！求解
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jiaoxiayoulu

新虫 (小有名气)

[求助] 酵母转化之后表现出抗性，但pcr无法验证出来！求解 已有1人参与

请教各位虫友：
我把工业酿酒酵母制成单倍体后，第一：我将KanMX基因转化进酵母，通过同源置换后敲除了某个基因！筛选后，挑出转化子进行抗G418液体培养，结果表现出抗性（对照组不能抗G418）。
  第二 在此基础上我进行了PCR验证 引物分别为 a b c d ,其中a,d分别为被敲除基因的上下游引物；b,c分别为KanMX内部的引物。
     我的问题在于 PCR后有ab,cd扩增出的条带（但比预期的条带略大一些），此外 不管怎样P了5,6次就是P不出ad条带（我用未做转化的基因组模板P了ad，结果有条带出现）！
   我现在非常的纳闷，问题不知出在哪里，请求大家帮忙分析分析！
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1楼 2013-10-10 20:01:55
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jincongcong

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

延伸时间时间加长，然后35+循环试试，原来我有个情况差不多的就是这么解决的
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4楼2013-12-14 12:17:54
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猫di阁楼

铜虫 (初入文坛)
我也有同样的问题
帮你顶个
同求大侠解决

另外请问你
你的转化子要多久可以长出来呢？
赞一下 回复此楼
2楼2013-11-12 19:30:14
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dllchina

木虫 (著名写手)

有机的微生物大神

【答案】应助回帖

应该是引物的问题吧，送去合成的序列还在么，看看有没有弄错。
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3楼2013-11-12 22:38:18
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jiaoxiayoulu

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 猫di阁楼 at 2013-11-12 19:30:14
我也有同样的问题
帮你顶个
同求大侠解决

另外请问你
你的转化子要多久可以长出来呢？

现在问题解决了，两天可以长的比较好了
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2013-12-16 20:44:59
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