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jiaoxiayoulu新虫 (小有名气)
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[求助]
酵母转化之后表现出抗性，但pcr无法验证出来！求解 已有1人参与
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请教各位虫友： 我把工业酿酒酵母制成单倍体后，第一：我将KanMX基因转化进酵母，通过同源置换后敲除了某个基因！筛选后，挑出转化子进行抗G418液体培养，结果表现出抗性（对照组不能抗G418）。 第二 在此基础上我进行了PCR验证 引物分别为 a b c d ,其中a,d分别为被敲除基因的上下游引物；b,c分别为KanMX内部的引物。 我的问题在于 PCR后有ab,cd扩增出的条带（但比预期的条带略大一些），此外 不管怎样P了5,6次就是P不出ad条带（我用未做转化的基因组模板P了ad，结果有条带出现）！ 我现在非常的纳闷，问题不知出在哪里，请求大家帮忙分析分析！ |
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