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雷焕

银虫 (小有名气)

[求助] 未知化合物用高效液相怎么样确定色谱条件?

我现在分离出化合物想上液相看看,但是色谱条件怎么设置呢?如果是做整个石油醚萃取层又怎么确定色谱条件呢?求各位学者能够给予帮助!谢谢!
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jzxzp

新虫 (初入文坛)

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雷焕: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢! 2013-10-07 08:03:03
xiaoxiao270: 金币+1, 谢谢交流 2013-10-07 08:14:55
高极性到低极性的流动相梯度洗脱,看看效果之后再不断优化。石油醚层极性较低,起始的甲醇或者乙腈可以调高一点。
2楼2013-10-06 23:58:17
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浪子燕青

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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雷焕: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢! 2013-10-07 16:52:43
xiaoxiao270: 金币+1, 谢谢 2013-10-07 20:40:34
首先,石油醚萃取层一般而言是极性比较低的成分,对于未知物质最好用梯度;由于是石油醚萃取层,因此,建议梯度从50% ACN开始至95% ACN;
其次,你要确定你的化合物有没有紫外吸收,好确定检测波长;如果无法确定,可以用DAD检测器,做全波长扫描190-600nm(或-400nm);
最后,通过以上的初步结果,做进一步的优化
3楼2013-10-07 14:08:47
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fgy20045832

木虫 (正式写手)

致良知,知行合一

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雷焕: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢! 2013-10-07 16:52:53
xiaoxiao270: 金币+1, 谢谢 2013-10-07 20:40:41
首先确定波长,做个全波长扫描,选取所有成分吸收值均比较大的波长作为检测波长;
其次定色谱条件,根据样品极性选择正相或反相色谱。
然后根据样品信息筛选色谱柱、流动相(pH、有机相水相比例、加不加缓冲盐、加不加调节剂)、柱温、流动相梯度条件等等。
建立方法的路很长,多查文献,借取经验,可以少走弯路。
通往天堂的路,正在修葺中...
4楼2013-10-07 16:46:58
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