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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 天然药物化学 » 未知化合物用高效液相怎么样确定色谱条件？
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雷焕

银虫 (小有名气)

[求助] 未知化合物用高效液相怎么样确定色谱条件？

我现在分离出化合物想上液相看看，但是色谱条件怎么设置呢？如果是做整个石油醚萃取层又怎么确定色谱条件呢？求各位学者能够给予帮助！谢谢！
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平静滴表面遮掩不住内心滴波澜！
1楼 2013-10-06 21:15:17
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jzxzp

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
雷焕: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢！ 2013-10-07 08:03:03
xiaoxiao270: 金币+1, 谢谢交流 2013-10-07 08:14:55
高极性到低极性的流动相梯度洗脱，看看效果之后再不断优化。石油醚层极性较低，起始的甲醇或者乙腈可以调高一点。
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2楼2013-10-06 23:58:17
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浪子燕青

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
雷焕: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢！ 2013-10-07 16:52:43
xiaoxiao270: 金币+1, 谢谢 2013-10-07 20:40:34
首先，石油醚萃取层一般而言是极性比较低的成分，对于未知物质最好用梯度；由于是石油醚萃取层，因此，建议梯度从50% ACN开始至95% ACN；
其次，你要确定你的化合物有没有紫外吸收，好确定检测波长；如果无法确定，可以用DAD检测器，做全波长扫描190-600nm（或-400nm）；
最后，通过以上的初步结果，做进一步的优化
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3楼2013-10-07 14:08:47
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fgy20045832

木虫 (正式写手)

致良知，知行合一

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
雷焕: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢！ 2013-10-07 16:52:53
xiaoxiao270: 金币+1, 谢谢 2013-10-07 20:40:41
首先确定波长，做个全波长扫描，选取所有成分吸收值均比较大的波长作为检测波长；
其次定色谱条件，根据样品极性选择正相或反相色谱。
然后根据样品信息筛选色谱柱、流动相（pH、有机相水相比例、加不加缓冲盐、加不加调节剂）、柱温、流动相梯度条件等等。
建立方法的路很长，多查文献，借取经验，可以少走弯路。
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通往天堂的路，正在修葺中...
4楼2013-10-07 16:46:58
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