24小时热门版块排行榜    

查看: 1246  |  回复: 8

liyan20220

木虫 (著名写手)

[求助] MBP标签和自己9K的蛋白分不开

融合表达MBP和自己的目的蛋白,待TEV酶切后,用Ni柱和superdex75都分不开,怎么样才能拿到自己的蛋白呢
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snoopyzxx

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 鼓励发帖交流应助分子生物欢迎你 2013-10-04 22:03:00
你用的什么载体啊?NEB的?
NEB的这个载体好像没有His标签吧?按道理,MBP标签和分子筛是可以分开的,需先确认确实酶切开了。
生物资源交流QQ群:1044518333
2楼2013-10-04 13:40:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyan20220

木虫 (著名写手)

按照道理应该是可以分开的,我用的pET28a载体,MBP前面具有His tag
3楼2013-10-04 21:19:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyan20220

木虫 (著名写手)

我跑胶确认切开了
4楼2013-10-04 21:19:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲,勿施于人

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流! 2013-10-06 02:09:27
唔,我以前也做过这样的试验,结果只有一部分挂柱, 在flow through里面确实拿不到特别纯的
不过如果用HPLC 这个尺寸差异应该是能分开的
而且很好奇你怎么除去Tev的呢?
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
5楼2013-10-04 23:56:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

charliswu

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-10-06 02:09:34
liyan20220: 金币+5 2013-10-06 14:31:19
MBP容易非特异性的和目的蛋白结合,可以尝试柱上酶切和离子交换纯化
6楼2013-10-05 15:55:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyan20220

木虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2013-10-04 23:56:39
唔,我以前也做过这样的试验,结果只有一部分挂柱, 在flow through里面确实拿不到特别纯的
不过如果用HPLC 这个尺寸差异应该是能分开的
而且很好奇你怎么除去Tev的呢?

我的目的蛋白和MBP一块下来了,穿出没有
7楼2013-10-06 14:30:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyan20220

木虫 (著名写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by charliswu at 2013-10-05 15:55:49
MBP容易非特异性的和目的蛋白结合,可以尝试柱上酶切和离子交换纯化

好的,我试试,谢谢
8楼2013-10-06 14:30:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

莫扎他

新虫 (初入文坛)

你好,请问最后问题怎么解决的呢?我的实验也碰到了类似的问题。
9楼2018-05-07 10:10:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 liyan20220 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 311求调剂 +6 南迦720 2026-02-28 6/300 2026-02-28 17:17 by 刘茉莉
[考研] 高分子化学与物理调剂 +3 好好好1233 2026-02-28 4/200 2026-02-28 17:13 by sandychj
[考研] 化工专硕348,一志愿985求调剂 +3 弗格个 2026-02-28 5/250 2026-02-28 17:04 by sandychj
[考博] 博士自荐 +3 kkluvs 2026-02-28 3/150 2026-02-28 16:59 by StarAura
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
[考博] 博士推荐 +4 花儿笑? 2026-02-21 5/250 2026-02-28 16:55 by mumin1990
[考研] 0856材料求调剂 +8 hyf hyf hyf 2026-02-28 9/450 2026-02-28 16:27 by etapple
[考研] 285求调剂 +3 满头大汗的学生 2026-02-28 3/150 2026-02-28 16:22 by 无际的草原
[考研] 312求调剂 +4 吃宵夜1 2026-02-28 5/250 2026-02-28 16:11 by gjm133
[考博] 26申博 +3 想申博! 2026-02-26 3/150 2026-02-28 16:07 by nxgogo
[考研] 材料类求调剂 +3 wana_kiko 2026-02-28 3/150 2026-02-28 15:03 by lature00
[考研] 295求调剂 +4 19171856320 2026-02-28 4/200 2026-02-28 13:39 by ms629
[考研] 290求调剂 +4 材料专硕调剂; 2026-02-28 5/250 2026-02-28 13:32 by houyaoxu
[考研] 304求调剂 +5 曼殊2266 2026-02-28 6/300 2026-02-28 12:44 by 迷糊CCPs
[硕博家园] 博士自荐 +6 科研狗111 2026-02-26 9/450 2026-02-28 12:32 by seaskyy
[考研] 272求调剂 +3 田智友 2026-02-28 3/150 2026-02-28 12:31 by 王加浩to
[考研] 298求调剂 +4 axyz3 2026-02-28 4/200 2026-02-28 11:21 by wang_dand
[基金申请] 什么是人一生最重要的? +10 瞬息宇宙 2026-02-21 10/500 2026-02-27 08:46 by tfang
[基金申请] 面上可以超过30页吧? +12 阿拉贡aragon 2026-02-22 13/650 2026-02-26 22:09 by Hahaxia
[教师之家] 版面费该交吗 +14 苹果在哪里 2026-02-22 17/850 2026-02-26 11:55 by AGI智创机器人
信息提示
请填处理意见