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liyan20220

木虫 (著名写手)

[求助] MBP标签和自己9K的蛋白分不开

融合表达MBP和自己的目的蛋白,待TEV酶切后,用Ni柱和superdex75都分不开,怎么样才能拿到自己的蛋白呢
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 鼓励发帖交流应助分子生物欢迎你 2013-10-04 22:03:00
你用的什么载体啊?NEB的?
NEB的这个载体好像没有His标签吧?按道理,MBP标签和分子筛是可以分开的,需先确认确实酶切开了。
生物资源交流QQ群:1044518333
2楼2013-10-04 13:40:37
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liyan20220

木虫 (著名写手)

按照道理应该是可以分开的,我用的pET28a载体,MBP前面具有His tag
3楼2013-10-04 21:19:08
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liyan20220

木虫 (著名写手)

我跑胶确认切开了
4楼2013-10-04 21:19:37
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲,勿施于人

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流! 2013-10-06 02:09:27
唔,我以前也做过这样的试验,结果只有一部分挂柱, 在flow through里面确实拿不到特别纯的
不过如果用HPLC 这个尺寸差异应该是能分开的
而且很好奇你怎么除去Tev的呢?
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
5楼2013-10-04 23:56:39
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charliswu

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-10-06 02:09:34
liyan20220: 金币+5 2013-10-06 14:31:19
MBP容易非特异性的和目的蛋白结合,可以尝试柱上酶切和离子交换纯化
6楼2013-10-05 15:55:49
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liyan20220

木虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2013-10-04 23:56:39
唔,我以前也做过这样的试验,结果只有一部分挂柱, 在flow through里面确实拿不到特别纯的
不过如果用HPLC 这个尺寸差异应该是能分开的
而且很好奇你怎么除去Tev的呢?

我的目的蛋白和MBP一块下来了,穿出没有
7楼2013-10-06 14:30:04
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liyan20220

木虫 (著名写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by charliswu at 2013-10-05 15:55:49
MBP容易非特异性的和目的蛋白结合,可以尝试柱上酶切和离子交换纯化

好的,我试试,谢谢
8楼2013-10-06 14:30:59
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莫扎他

新虫 (初入文坛)

你好,请问最后问题怎么解决的呢?我的实验也碰到了类似的问题。
9楼2018-05-07 10:10:37
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