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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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liyan20220

木虫 (著名写手)

[求助] MBP标签和自己9K的蛋白分不开

融合表达MBP和自己的目的蛋白，待TEV酶切后，用Ni柱和superdex75都分不开，怎么样才能拿到自己的蛋白呢
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1楼 2013-10-03 21:54:47
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 鼓励发帖交流应助分子生物欢迎你 2013-10-04 22:03:00
你用的什么载体啊？NEB的？
NEB的这个载体好像没有His标签吧？按道理，MBP标签和分子筛是可以分开的，需先确认确实酶切开了。
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生物资源交流QQ群：1044518333
2楼2013-10-04 13:40:37
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liyan20220

木虫 (著名写手)
按照道理应该是可以分开的，我用的pET28a载体，MBP前面具有His tag
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3楼2013-10-04 21:19:08
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liyan20220

木虫 (著名写手)
我跑胶确认切开了
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4楼2013-10-04 21:19:37
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2013-10-06 02:09:27
唔,我以前也做过这样的试验,结果只有一部分挂柱, 在flow through里面确实拿不到特别纯的
不过如果用HPLC 这个尺寸差异应该是能分开的
而且很好奇你怎么除去Tev的呢?
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
5楼2013-10-04 23:56:39
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charliswu

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-06 02:09:34
liyan20220: 金币+5 2013-10-06 14:31:19
MBP容易非特异性的和目的蛋白结合，可以尝试柱上酶切和离子交换纯化
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6楼2013-10-05 15:55:49
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liyan20220

木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2013-10-04 23:56:39
唔,我以前也做过这样的试验,结果只有一部分挂柱, 在flow through里面确实拿不到特别纯的
不过如果用HPLC 这个尺寸差异应该是能分开的
而且很好奇你怎么除去Tev的呢?

我的目的蛋白和MBP一块下来了，穿出没有
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7楼2013-10-06 14:30:04
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liyan20220

木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by charliswu at 2013-10-05 15:55:49
MBP容易非特异性的和目的蛋白结合，可以尝试柱上酶切和离子交换纯化

好的，我试试，谢谢
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8楼2013-10-06 14:30:59
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莫扎他

新虫 (初入文坛)
你好，请问最后问题怎么解决的呢？我的实验也碰到了类似的问题。
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9楼2018-05-07 10:10:37
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