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HeLa细胞传代后90% 死亡，求解
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本人菜鸟，才开始学养细胞。 替别人传 细胞，结果HeLa细胞状态好，长的太快，本是第二天下午传的，结果没时间，第三天中午传的。因为细胞长的很满，不过也有很多死细胞，就一个大瓶传了一个中瓶，两个大瓶。镜检，三个瓶子中细胞浓度很大。根据以前的经验，长一天绝对很满。结果第四天早上，也就是今天早晨看的时候，90%的细胞飘起来了，只有10%细胞贴壁生长，而且状态不好。 这次的培养基是新配的，初步认为可能是新配置的培养基没有混合均匀，因为我加入FBS和双抗之后，只是左右晃动几下培养基，10min之后开始用这个培养基（配置培养基后才开始消化细胞），不知道是不是这个原因。 双抗是找别人借的，人家说浓度是100 X 的。DMEM是新的，FBS是用过的，冰箱放置了约3天吧。 其次是前天传了一批自己养的HeLa细胞，培养基是以前的，昨天看还是可以的，死细胞不多，只是贴壁细胞不多，但是今天早上看的时候，也是很多死细胞，状态不好，不知道什么原因。 不知道是不是污染导致这些细胞离我而去？求大侠们解答。 |
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| 传代后状态不好或者死的一般就四个原因：1.接触细胞的液体温度过低2.胰酶浓度过高或者消化时间过长3.吹打分散时力度过大或吹打时间过长4.细胞污染。你的DMEM培养基从4℃冰箱拿出来之后有没有经过温箱复温？一般在换液或者传达之前要把培养基、PBS、胰酶放进37℃温箱复温30min左右。细胞状态本来很好的话接触凉的培养基一般都会变的很差，状态不好的细胞接触凉的培养基一般都会挂掉。由于没说你胰酶使用浓度，所以不好判断是不是消化过头，或者吹打分散细胞时太大力。细胞污染很容易判断，传代后培养基变浑浊，或者颜色变黄或者镜检能看到很多小黑点就是污染了。 |
6楼2013-09-30 14:09:30
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【答案】应助回帖
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Hela细胞，长得快，但是非常矫情的一个细胞系。别的细胞系不换培养液都是一个个的死，及时补换培养液还是有救的。Hela细胞要死那就是商量好了，一瓶一瓶的死，一个不拉的去见马克思。 高糖培养液基本不会饿死细胞系，除了变成非常黄的时候。 觉得可能还是消化、重悬的哪一个步骤出了问题。 采用含EDTA的胰酶消化效果会好很多，海拉细胞消化的话基本是一粒一粒的，不像其他的细胞会一团一团的下来（但是一团一团消化下来的细胞贴壁、生长的可能会更快）。 Hela细胞个人觉得不适合新手练手的，因为这细胞非常矫情。很容易一个不留的死光光。觉得hela细胞优势就是长得快，缺点就是非常容易死光光（别的细胞系都是一个一个的死，这货真是一瓶一瓶的死）。 养细胞不要怕，多练几次就好，Hela细胞养死了就不要花心思拯救，直接换一批新的Hela细胞就好 |
8楼2013-09-30 22:37:27
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