| 查看: 3264 | 回复: 12 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
HeLa细胞传代后90% 死亡，求解
|
|||
|
本人菜鸟，才开始学养细胞。 替别人传 细胞，结果HeLa细胞状态好，长的太快，本是第二天下午传的，结果没时间，第三天中午传的。因为细胞长的很满，不过也有很多死细胞，就一个大瓶传了一个中瓶，两个大瓶。镜检，三个瓶子中细胞浓度很大。根据以前的经验，长一天绝对很满。结果第四天早上，也就是今天早晨看的时候，90%的细胞飘起来了，只有10%细胞贴壁生长，而且状态不好。 这次的培养基是新配的，初步认为可能是新配置的培养基没有混合均匀，因为我加入FBS和双抗之后，只是左右晃动几下培养基，10min之后开始用这个培养基（配置培养基后才开始消化细胞），不知道是不是这个原因。 双抗是找别人借的，人家说浓度是100 X 的。DMEM是新的，FBS是用过的，冰箱放置了约3天吧。 其次是前天传了一批自己养的HeLa细胞，培养基是以前的，昨天看还是可以的，死细胞不多，只是贴壁细胞不多，但是今天早上看的时候，也是很多死细胞，状态不好，不知道什么原因。 不知道是不是污染导致这些细胞离我而去？求大侠们解答。 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 分子生化实验经验积累 |
» 猜你喜欢
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有195人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有15人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
超然渡陈
金虫 (小有名气)
- MolEPI: 4
- 应助: 50 (小学生)
- 金币: 1174.9
- 帖子: 127
- 在线: 41.7小时
- 虫号: 1110016
- 注册: 2010-09-28
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+5, 鼓励回帖交流！ 2013-09-30 17:29:21
gyesang: 回帖置顶 2013-09-30 17:29:23
挫人小鱼: 金币+3 2013-10-07 17:45:56
挫人小鱼: 金币+4 2013-10-07 17:46:56
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+5, 鼓励回帖交流！ 2013-09-30 17:29:21
gyesang: 回帖置顶 2013-09-30 17:29:23
挫人小鱼: 金币+3 2013-10-07 17:45:56
挫人小鱼: 金币+4 2013-10-07 17:46:56
| 传代后状态不好或者死的一般就四个原因：1.接触细胞的液体温度过低2.胰酶浓度过高或者消化时间过长3.吹打分散时力度过大或吹打时间过长4.细胞污染。你的DMEM培养基从4℃冰箱拿出来之后有没有经过温箱复温？一般在换液或者传达之前要把培养基、PBS、胰酶放进37℃温箱复温30min左右。细胞状态本来很好的话接触凉的培养基一般都会变的很差，状态不好的细胞接触凉的培养基一般都会挂掉。由于没说你胰酶使用浓度，所以不好判断是不是消化过头，或者吹打分散细胞时太大力。细胞污染很容易判断，传代后培养基变浑浊，或者颜色变黄或者镜检能看到很多小黑点就是污染了。 |
6楼2013-09-30 14:09:30
arystal
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1344.4
- 帖子: 96
- 在线: 240.8小时
- 虫号: 869198
- 注册: 2009-10-12
- 性别: MM
- 专业: 细胞信号转导
2楼2013-09-29 13:46:27
3楼2013-09-29 16:22:30
梦幻未碎
木虫 (小有名气)
- 应助: 12 (小学生)
- 金币: 3027.2
- 散金: 10
- 红花: 1
- 帖子: 249
- 在线: 33.4小时
- 虫号: 2017562
- 注册: 2012-09-20
- 性别: MM
- 专业: 细胞生物学研究中的新方法
4楼2013-09-29 17:01:58
